Бак посев крови

Анализ крови Бактериологический посев крови назначают для подтверждения или исключения наличия в крови микроорганизмов: бактерий (бактериемия) или грибов (фунгемия). Этот анализ показан в следующих клинических случаях:

• Подозрение на сепсис (системная воспалительная реакция, вызванная инфекцией).
• Диагностика заболеваний, при которых характерно распространение инфекции с кровотоком (например, остеомиелит – инфекционное поражение костной ткани, костного мозга и окружающих тканях; инфекционный артрит – инфекционное поражение тканей суставов; эндокардит – инфекционное поражение внутренней оболочки сердца и т.д.). То есть, при положительном результате анализа на бактериологический посев крови есть основание ставить диагноз этих состояний.
• Лихорадка (повышение температуры тела и озноб) неясного генеза (когда в течение 10 дней и более наблюдается повышение температуры тела без видимой причины). Обследование таких пациентов обычно подразумевает бактериологический посев крови с целью обнаружения возбудителя.

ПРИНЦИПЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА КРОВИ

Основная задача микробиологического анализа крови – исследовать биологический материал на наличие микроорганизмов (бактерий или грибов). Определить наличие бактерий в образце крови (подтвердить или исключить) путем только микроскопического исследования невозможно, поскольку в ней содержится недостаточное количество микробов. Чтобы выявить наличие микроорганизмов, их нужно размножить в жидкой питательной (культуральной) среде, в которой содержаться все необходимые компоненты для успешного роста. При добавлении в культуральную среду образца крови, контейнер инкубируется при оптимальной для роста микроорганизмов (+37°C) до момента, когда культура микробов не становится заметной. Сроки инкубации образца занимают, как правило, от 6-18 часов до нескольких дней и даже недель (если определяются микроорганизмы с медленным ростом). Практический лабораторный опыт показывает, что если в течение 3-х дней инкубации не наблюдается очевидный рост бактерий, то вероятность наличия инфекции в культуре (то есть образце крови, который был помещен в культуральную среду) очень низкая. Несмотря на это, за культурой продолжают наблюдение, поскольку в ней могут обнаруживаться медленно растущие виды микроорганизмов.

В случае обнаружения видимого роста микроорганизмов, обогащенная бактериями культура окрашивается, после чего исследуют под микроскопом. Микроскопическое исследование выращенной в образце крови культуры – первый шаг идентификации вида микроорганизмов (палочки, грамотрицательные или грамположительные кокки и т.д.). Для более точной идентификации выполняют посев жидкой культуры на плотной среде в чашке Петри. В плотной культуральной среде (в чашке Петри) наблюдают рост колоний микроорганизмов, каждая из которых размножается только от одной единственной бактериальной клетки. Затем из одной колонии берут образец, над которым проводят химические исследования. Именно химические тесты позволяют точно определить вид микроорганизма.

После выделения и идентификации вида микроорганизма, определяют их чувствительность к антибактериальным препаратам. Полученные данные позволяют назначить пациенту максимально эффективную терапию (лечение).

Нужно отметить, что бактериемия и фунгемия – опасные состояния, представляющие угрозу жизни, поэтому требуют срочной терапии антибактериальными препаратами. При подозрении на эти состояния, учитывая клиническую картину, лечение назначают немедленно, не дожидаясь результатов микробиологического исследования. При этом, когда известен результат лабораторного анализа (особенно показатели чувствительности к антибиотикам, который, как правило, лаборатории выдают через 3-4 дня), в случае необходимости, антибактериальный препарат может быть заменен на более эффективный.

Забор крови

Главная цель при заборе образца крови – поместить полученный образец в контейнер с культуральной средой, при этом необходимо избегать любое возможное загрязнение (с кожи больного, рук медицинского персонала, из окружающей среды и т.д.).

Время забора крови

Забор образца крови для проведения микробиологического анализа нужно проводить до начала антибиотикотерапии. В противном случае рост микроорганизмов в культуре может быть отсрочен или полностью предотвращен, что приведет к получению ложноотрицательного результата.

Если у пациента перемежающаяся лихорадка (febris intermittis; быстрое, значительное повышение температуры тела, которая держится несколько часов, после чего также быстро опускается до нормальных значений), забор крови необходимо проводить (по мере возможности) в момент повышение температуры тела или сразу же после прохождения пика температурного показателя – в этот период максимально повышается количество микроорганизмов в крови.

Большинство лабораторий рекомендуют проводить второй забор крови не позднее чем через 1 час после первого забора. Таким образом повышаются шансы выявления инфекции, а также появляется возможность отличить истинную бактериемию (при истинной бактериемии микробы обнаруживаются в обоих образцах крови) от бактериального загрязнения.

Контейнеры для культивирования образца крови

Образец крови собирают в специальные стерильные контейнеры с жидкой культуральной средой. Существует несколько видов таких контейнеров, содержащих культуральную среду, которая представляет собой жидкую смесь питательных компонентов, обеспечивающих рост микроорганизмов.

Для забора образца крови на бактериальный посев многие лаборатории предоставляют два вида контейнеров: один контейнер содержит кислород над жидкой средой (кислород необходим для роста аэробных микроорганизмов), другой – смесь газов без кислорода (для культивирования микробов, которые развиваются только в условиях отсутствия кислорода). В этом случае образец крови собирается в оба контейнера.

Необходимый объем крови

При бактериемии в 1 мл крови может содержаться всего лишь одна микробная клетка, поэтому недостаточное количество крови, собранной в контейнер с культуральной средой, может быть причиной получения ложноотрицательного результата анализа.

Тем не менее ложноотрицательный результат можно получить и при внесении в культуральную среду очень большого количества крови. Дело в том, что в культуре кровь продолжает оказывать бактерицидное действие, если она не разведена до достаточной степени в культуральной среде. Для получения достоверного результата анализа нужно соблюдать необходимые пропорции крови и культуральной среды, чтобы соблюсти эффект разведения. Оптимальным разведение крови в культуральной среде считается пропорция 1:10. При этом необходимый объем крови (как правило 5-10 мл) зависит непосредственно от самой культуральной среды, которая внесена в контейнер для сбора биологического материала.

Важно, чтобы в каждый контейнер было внесено то количество крови, которое требует бактериологическая лаборатория.

Техника забора крови

При сборе образца крови на микробиологический анализ необходимо строго придерживаться правил асептика, чтобы исключить бактериальное загрязнение культуры. При условии соблюдения правил, в контейнер с культуральной средой попадает только тот микроорганизм, который содержится в крови пациента.

• Забор образца крови проводят только из периферической вены. При этом нельзя использовать постоянный венозный катетер, так как он может быть загрязнен бактериями.
• Процедура забора образца крови проводится в стерильных перчатках. Место венепункции необходимо обработать соответствующим дезинфицирующим раствором и подождать, пока он высохнет (венепункция должна проводиться на сухой коже). Также необходимо продезинфицировать поверхность контейнера с культуральной средой (особенно крышку), куда будет помещен образец крови.
• Венепункция проводится стерильными шприцом и иглой (к месту пункции руками не прикасаться).
• В контейнер с культуральной средой кровь вносят через закрывающую его резиновую пробку. Резиновую пробку никогда нельзя снимать с контейнера, так как в культуральную среду могут попасть бактерии из окружающей среды.
• Если у пациента нужно взять кровь для проведения сразу нескольких анализов, в первую очередь нужно заполнить контейнер с культуральной средой. Таким образом предотвращают попадание микроорганизмов с другой лабораторной посуды.
• Контейнер с культурой крови должен быть промаркирован (на этикетке должны быть внесены точные данные пациента) и вместе с сопроводительной документацией как можно быстрее доставлен в лабораторию. Если немедленная отправка полученного образца невозможна, контейнер нужно поместить в термостат при температуре 37°С (таким образом обеспечив условия для роста микроорганизмов). Отметим, что в сопроводительной документации, которая отправляется в лабораторию, нужно указать основные клинические данные и сведения об антибактериальное терапии, если таковая проводилась (или проводится) до момента взятия образца крови.

Интерпретация результатов анализа

Большинство лабораторий при наблюдении за культурой крови обычно выдают ежедневные промежуточные заключения. Окончательный результат исследования включает точную идентификацию вида микроорганизмов, обнаруженных в культуре, а также данные о чувствительности (или устойчивости) данного вида к антибиотикам.

Результаты бактериологического посева крови делят на следующие группы:

• Рост микроорганизмов отсутствует
• Чисты рост
• Смешанный рост

Отсутствие роста микроорганизмов

Отсутствие роста бактерий в культуральной среде – нормальный результат, который означает, что кровь стерильна. Тем не менее, перед тем, как интерпретировать такой результат, необходимо убедиться, что он не является ложноотрицательным (то есть, у больного есть бактериемия, которую не удалось подтвердить лабораторно с помощью этого анализа). Основными причинами получения ложноотрицательного результата являются:

• Недостаточный объем крови, помещенный в культуральную среду
• До момента забора крови пациент принимал антибиотики
• Недостаточный инкубационный период для роста редких видом микроорганизмов, которые долго растут

Чистый рост микроорганизмов

Чистый рост микроорганизмов означает, что определяется развитие только одного вида бактерии (Escherichia coli (Кишечная палочка), Staphylococcus aureus (Золотистый стафилококк), Streptococcus pneumonia (Пневмококк) и др), обнаруженного в культуре. Если у пациента сепсис, чистый рост микроорганизмов – ожидаемый результат. Отметим, что около 10-20% случаев обнаруженная инфекция происходит не з крови пациента, а попадают в культуральную среду из-за нарушений правил асептики при заборе крови на анализ.

Отметим, что возбудителем септицемии может выступать любой вид бактерий, поэтому бывает трудно определить, является ли чистый рост бактерии в культуральной среде результатом бактериального загрязнения (ложноположительный результат) или истинно отражает септицемию (положительный результат).

Предположим, что посев крови позволил выделить, например, Staphylococcus epidermidis (Эпидермальный стафилококк), который в норме присутствует на коже каждого человека. Эта бактерия легко может попасть в культуральную среду с кожи пациента или медицинского персонала в момент забора крови. И несмотря на то, что Staphylococcus epidermidis действительно является одним из самых распространенных внешних загрязнителей культуры крови (что приводит к ложноположительному результату при посеве крови), этот кокк также выступает в роли одного из самых распространенных возбудителей септицемии у больных при инфицировании венозного катетера. Кроме этого, эпидермальный стафилококк может быть возбудителем эндокардита у пациентов после операций на сердце. То есть, обнаружение этой бактерии при посеве может означать как внешнее загрязнение, так и обладать клиническим значением.

Именно такие микроорганизмы, как эпидермальный стафилококк, входящие в состав нормальной микрофлоры человека, являются наиболее распространенными внешними загрязнителями культуры крови.

Тем не менее, чистый рост любой инфекции в культуре крови скорее всего является признаком септицемии, а не бактериального загрязнения, при условии, что этот же вид микроорганизма был выделен:

• При повторном заборе образца крови у пациента
• У пациента из любого другого инфекционного очага

Смешанный рост микроорганизмов

Получение смешанного роста означает, что в культуре крови выделяется более одного вида микроорганизмов. Истинное инфицирование крови более чем одним видом микроорганизмов происходит очень редко, поэтому такой результат, в большинстве случаев, является подтверждением загрязнения культуральной среды по причине нарушения правил асептики, особенно если выделенные изолированные виды инфекции относятся к обыкновенным контаминантам. Интерпретация такого результата анализа очень затруднительная и требует привлечения специалиста-микробиолога.

Посев крови – метод бактериологического исследования, использующийся для достоверного определения наличия бактерий в крови.

Посев используют для выявления в ней различных микроорганизмов приходится делать при многих заболеваниях. Посев крови осуществляют для обособленности, чтобы идентифицировать болезнетворных бактерий при бактериемии.

Бактериемия — это проникновение бактерий в кровь при генерализации инфекции в организме человека, заражении крови (сепсис). Данный вид анализа проводится в лабораториях медицинских учреждений.

Делают посев крови на жидкие питательные среды:

• желчный бульон,
• сахарный бульон,
• жидкие и полужидкие среды для выращивания микробов анаэробов.

Сколько раз нужно сдавать Бак посев крови

Для обнаружения микроорганизмов требуется несколько анализов не менее 3, так как количество бактерий в крови может колеблется.

Определенные виды бактерий можно выделить только специальными бактериологическими посевами (бак посев) крови.

Бак посев крови — что показывает

Бак посев крови показывает чувствительность к антибиотикам той или иной группы бактерий. Определив вид выращенной колоний бактерий после посева, (микробиологического исследования) можно подобрать эффективные антибиотики против именно этой группы микроорганизмов (так называемый посев крови на стерильность).

• Это важно! Перед анализом на посев крови на инфекции — Не принимайте анатибиотики!

Обнаружить бактерии будет трудно или вообще невозможно, если человек перед анализом посева крови принимал антибиотики, при продолжающемся инфицировании болезнетворными микроорганизмами.

Как сдавать кровь на бак посев

Для наиболее точного диагностирования заболеваний недостаточно самого современного лабораторного оборудования.

Точность результатов зависит не только от используемых реактивов и аппаратуры, но и от времени и правильности сбора исследуемого материала. При несоблюдении основных правил подготовки к анализам их результаты могут быть значительно искажены.

Для исследования крови более всего подходят утренние часы

Для большинства исследований кровь берется строго натощак.

Кофе, чай и сок – это тоже еда.

Можно пить воду.

Рекомендуются следующие промежутки времени после последнего приема пищи:

• для общего анализа крови не менее 3-х часов;
• для биохимического анализа крови желательно не есть 12-14 часов (но не менее 8 часов).

За 2 дня до обследования необходимо отказаться от алкоголя, жирной и жареной пищи.

За 1-2 часа до забора крови не курить.

Перед исследованием крови следует максимально снизить физические нагрузки.

• Исключить бег, подъем по лестнице.
• Избегать эмоционального возбуждения.
• Минут10-15 нужно отдохнуть, расслабиться и успокоиться.

Нельзя сдавать кровь сразу после физиотерапевтических процедур, ультразвукового и рентгенологического исследования, массажа и рефлексотерапии.

Перед сдачей крови нужно исключить перепады температур, то есть баню и сауну.

Перед гормональным исследованием крови у женщин репродуктивного возраста следует придерживаться рекомендаций лечащего врача о дне менструального цикла, в который необходимо сдать кровь, так как на результат анализа влияют физиологические факторы фазы менструального цикла.

Перед сдачей крови необходимо успокоиться, чтобы избежать немотивированного выброса в кровь гормонов и увеличение их показателя.

Для сдачи крови на вирусные гепатиты желательно за 2 дня до исследования исключить из рациона цитрусовые, оранжевые фрукты и овощи.

Для правильной оценки и сравнения результатов ваших лабораторных исследований рекомендуется проводить их в одной и той же лаборатории

В разных лабораториях могут применяться разные методы исследования и единицы измерения показателей.

Бак посев можно назвать древним анализом, однако его популярность от этого отнюдь не падает, хотя современная бактериология имеет возможности найти и выделеть не только штаммы, но и отдельной клетки из него, которая называется клоном.

Однако для получения клона необходим специальный прибор – микроманипулятор, который в обычных лабораториях отсутствует, поскольку применяется, в основном, в научно-исследовательских целях (генетические исследования).

Посев менструальной крови на туберкулез

Результат оценивается после трехкратного посева. На посев берутся выделения из влагалища, менструальную кровь, соскоб или смыв эндометрия, содержимое очагов воспаления (например, из язв на шейке матки).

Даже проведение трехкратного посева дает низкий процент высеваемости палочек Коха. В дополнение используют ПЦР полученного биологического материала.

Посев крови на грибковые инфекции

Количественную оценку грибковой инфекции можно дать с помощью посева грибков (культуральный метод).

Для таких целей материал с кожи, ногтей или волос собирают, как и в случае микроскопического исследования, далее:

• Биологический материал переносят в специальную питательную среду.
• Если во взятых образцах были грибки, то через некоторое время вырастают колонии.
• Затем колонии изучаются под микроскопом, что позволяет определить род и вид грибка, а также его концентрацию.

Кроме того, возможно и проведение тестов на чувствительность грибков к определенным противогрибковым препаратам, что позволяет подобрать больному оптимальную схему лечения.

Посев крови на аэробные и анаэробные бактерии

Посев крови необходим для определения возбудителя инфекционного процесса. В норме кровь является стерильной и только при определенной части заболеваний, в нее могут проникать микроорганизмы.

Такой тип инфицирования называется бактериемией.

Наиболее тяжелый вариант бактериемии – сепсис (септицемия, септикопиемия), но данное состояние проявляется яркой клинической картиной и в основном является уделом стационаров (в том числе отделения реанимации).

Не всегда наличие возбудителя в крови приводит к сепсису. Возможна даже физиологическая бактериемия (она кратковременная и может возникать, например, при чистке зубов и неосторожном травмировании десен).

И все же, если микроорганизм попал в кровь, необходимо его выделить, определить и выяснить, к каким антимикробным препаратам он может быть чувствителен.

В этом случае применяется посев на аробные и анаэробные бактерии.

Аэробные бактерии имеют зависимость от кислорода (то есть их размножение без кислорода невозможно или возможно, но очень кратковременно).

Анаэробные бактерии в свою очередь имеют способность размножаться и без присутствия вокруг них источников кислорода.

Другое название для посева на аэробные и анаэробные бактерии является посев крови на стерильность.

Как и в любом другом исследовании, посев может быть ложноотрицательным, это связано со спецификой забора крови при данном исследовании (очень часто, забор крови нужно проводить на высоте лихорадки – повышения температуры тела).

Ложноположительный результат – при несоблюдении правил стерильности лабораторного инструментария, что в современных лабораториях крайне недопустимо и обычно такого не происходит.

В некоторых случаях для подтверждения диагноза необходимо использовать трехкратный посев на стерильность, то есть кровь забирается три раза с небольшим промежутком во времени.

После успешного забора крови для посева на аэробные и анаэробные бактерии, данный материал помещают на питательную среду. В течение определенного времени начинается рост колоний бактерий, присутствующих в кровотоке пациента.

При помощи различных лабораторных тестов исследователь проводит идентификацию бактерии, а также выполняет тест на чувствительность к антибактериальным препаратам, что в дальнейшем поможет лечащему врачу назначить наиболее эффективное лечение болезни.

Бак посев крови на стафилококк

Если возникает подозрение, что в теле развивается стафилококк, в первую очередь, не надо паниковать.

Обнаружение стафилококка клиническом посеве в концентрации 10 в 3 степени при бессимптомном носительстве не угрожает человеку. Вам необходимо обратить внитание на укрепление иммунитета.

Для точного определения, стафилококк ли является возбудителем заболевания, у больного берут на исследование биоматериалы. Это может быть кровь, содержимое гнойничков, отходящая мокрота, а в некоторых ситуациях и спинномозговая жидкость.

Значимые показатели анализа – выявление в сыворотке крови антител к антигенам стафилококка. Для этого используют реакцию торможения гемолиза, реакцию пассивной гемагглютинации. Одновременно проверяется чувствительность бактерии к различным противомикробным препаратам, чтобы в последующем сделать правильный выбор лекарства для борьбы с ним.

В случае если человек относится к группе пациентов с повышенным риском стафилококковой инфекции (из-за перенесенных заболеваний, других причин, вызвавших ослабление иммунной системы), врач может рекомендовать прохождение быстрого теста на коагулазу.

Такое тестирование – надежный способ определения кокков в крови. Если он покажет положительный результат – значит возбудителем стал золотистый стафилококк, если отрицательный – эпидермальный или сапрофитный.

Посев крови на гемокультуру — алгоритм

Итак, материалом для бактериологического посева является кровь в количестве 5 – 10 мл, полученная из локтевой вены.

Участок кожи обрабатывается сначала ватным шариком, смоченным в 70 % — ном этиловом спирте, а затем другим ватным шариком, смоченным в 1 – 2 % — ном растворе йода, до полного высыхания кожи.

Алгоритм здесь может быть такой же, как и при заборе крови вакуумными шприцами с той разницей, что вместо пробирки в переходник вставляется гемокультурный флакон.

В месте венепункции йод вытирают спиртом и заклеивают этот участок пластырем. Пластиковую крышку данного флакона отламывают, обеззараживают внутреннюю поверхность крышки 70 % этиловым спиртом.

При температуре 37°С кровь нужно хранить не более 2–х часов!

Лучше всего произвести посев крови на питательную среду сразу после её забора.

Соотношение крови и питательной среды – 1: 10,осторожно перемешать.

Для получения наиболее достоверного результата проведение анализа должно быть как минимум двоекратным из разных рук с интервалом времени в 30 минут.

Достоинства посева крови этим методом

Вышеописанного метода в том, что имеет он адекватную стоимость, высокую информативность, простоту в выполнении, а главное – доступность!

В настоящее время существуют два способа посева крови на питательную среду и определение чувствительности к антибиотикам:

1. посев на флору с выявлением чувствительности к широкому спектру антибиотиков;
2. посев на флору с выявлением чувствительности к основному спектру антибиотиков.

Видео: Анализ на стерильность крови

Известно, что микроорганизмы, невзирая на свой «малый рост», тоже имеют пищевые «пристрастия», температурный оптимум, в общем, среду, которая им идеально подходит, где они чувствуют себя комфортно и хорошо, а поэтому начинают интенсивно размножаться и расти.

Бактериологический посев или, как принято называть короче – бак посев, применяется для получения большого количества микробов одного вида (чистая культура) с целью изучения их физико-химических и биологических свойств, чтобы затем полученные данные использовать для диагностики инфекционных заболеваний.

К сожалению, даже популярные нынче иммуноферментный анализ (ИФА), полимеразная цепная реакция (ПЦР) и другие методы, основным недостатком которых являются ложноположительные или ложноотрицательные результаты, не всегда могут идентифицировать возбудителя. Кроме того, они не способны подобрать антибактериальные препараты направленного действия. Подобную задачу решает бак посев, который часто не спешат назначать, ссылаясь на то, что, например, уреа- микоплазмы медленно культивируется, а стоимость анализа немалая. Однако ведь и здоровье того стоит!

Для питания и дыхания нужны условия

Микробиологи нынче знают, что каждому возбудителю нужна своя «родная» среда с учетом ее рН, окислительно-восстановительных потенциалов, вязкости, влажности и осмотических свойств. Среды могут быть мягкими и твердыми, простыми и сложными, универсальными и не очень, однако во всех случаях они должны обеспечивать питание, дыхание, размножение и рост бактериальной клетки.

пример роста микроорганизмов после бак-посева в питательную среду

Некоторые среды (тиогликолевая, Сабуро) подходят для широкого круга микроорганизмов и называются универсальными. Другие же предназначены только для определенных видов, например, пневмококк и золотистый стафилококк, продуцирующие гемолизины, растут на кровяном агаре, который служит для выделения особо «капризных» и, вместе с тем, опасных штаммов. Таким образом, разновидностей сред множество, где каждая из них выращивает свой круг микроорганизмов.

Цель культивирования микроорганизмов и значимость ее для диагностики

Кроме воды, воздуха, почвы, содержащие в тех или иных концентрациях различные микроорганизмы, в том числе и приносящие болезнь (патогенные), многие отрасли медицинской науки интересуют микробы, живущие на коже и слизистых человеческого организма, которые могут быть представлены:

• Постоянными обитателями, не несущими никакой опасности человеку, то есть, нормальной микрофлорой организма, без которой мы просто жить не можем. Например, исчезновение бактерий, живущих в кишечнике и участвующих в процессе пищеварения, приводит к дисбактериозу, лечить который – дело непростое. Так же происходит и с исчезновением вагинальной микрофлоры. Ее тут же заселяют условно-патогенные микроорганизмы, гарднереллы, например, которые вызывают бактериальный вагиноз (гарднереллез);
• Условно-патогенной флорой, которая приносит вред лишь в больших количествах при определенных условиях (иммунодефицит). Вышеназванная гарднерелла – представитель такого типа микроорганизмов;
• Наличием патогенных микробов, которые в здоровом теле не присутствуют. Они чужды человеческому организму, куда попадают случайно при контакте с другим (больным) человеком и вызывают развитие инфекционного процесса, порой, довольно тяжелого или даже смертельного. Например, встреча с возбудителями сифилиса – еще куда ни шло, на первых порах лечится, а вот (упаси Бог!) выпустит на волю холеру, чуму, черную оспу и др.

К счастью, многие из них побеждены и в настоящее время находятся «за семью печатями» в специальных лабораториях, однако человечество в любой момент должно быть готово к нашествию невидимого врага, способного уничтожить целые народы. Бактериологический посев в подобных случаях играет, пожалуй, главную роль в идентификации микроорганизма, то есть, определении рода, вида, типа и т.д. (токсономическое положение), что очень важно для диагностики инфекционных процессов, в том числе и заболеваний, передающихся половым путем.

Таким образом, методы посева, как и питательные среды, бывают разными, тем не менее, цель у них одна: получить чистую культуру без посторонних примесей в виде микробов других классов, которые обитают повсеместно: в воде, в воздухе, на поверхностях, на человеке и внутри его.

Когда назначается бак посев и как разобраться в ответах?

Название микроорганизма и его количество

Бактериологический анализ пациенты сами себе не назначают, это делает врач, если у него есть подозрения, что проблемы больного, предъявляющего различные жалобы, связаны с проникновением в организм патогенного возбудителя или с усиленным размножением микроорганизмов, постоянно живущих с человеком, но проявляющих патогенные свойства только в определенных условиях. Сдав анализ и через некоторое время получив на руки ответ, человек теряется, а порой и пугается, увидев непонятные слова и обозначения, поэтому, чтобы этого не произошло, хочется дать краткое разъяснение по данному вопросу:

1. Первым пунктом заключения, как правило, стоит название возбудителя на латинском языке, например, Escherichiacoli. Это – кишечная палочка, она является естественным обитателем кишечника и в допустимых количествах никакого вреда не приносит;
2. Следующий пункт – концентрация микроорганизма. Е.coli– обильный рост (1х10^ 6 и более) норма – менее 1x10^ 4 ;
3. Далее – патогенность: флора условно-патогенная.

При исследовании биологического материала на присутствие патогенных микроорганизмов ответ может быть отрицательным или положительным («плохой бак посев»), поскольку организм человека является для них лишь временным пристанищем, а не естественной средой обитания.

Иной раз, в зависимости от того, какой материал подлежит посеву, можно увидеть количество микроорганизмов, выраженное в колониеобразующих единицах на мл (одна живая клетка даст рост целой колонии) – КОЕ/мл. Например, посев мочи для бактериологического исследования при норме дает до 10 3 КОЕ/мл всех выявленных бактериальных клеток, в сомнительных случаях (анализ повторить!) – 10 3 – 10 4 КОЕ/мл, при воспалительном процессе инфекционного происхождения – 10 5 и выше КОЕ/мл. О двух последних вариантах в разговорной речи, порой, выражаются просто: «Плохой бак посев».

Как «найти управу» на патогенный микроорганизм?

Одновременно с посевом материала в таких ситуациях производится посев микрофлоры на чувствительность к антибиотикам, который даст четкий ответ врачу – какие антибактериальные препараты и в каких дозах «испугают» «незваного гостя». Здесь тоже есть своя расшифровка, например:

• Вид микроорганизма, допустим, та же Е.coli в количестве 1х10^ 6 ;
• Название антибиотика с обозначением (S) указывает на чувствительность возбудителя к этому препарату;
• Вид антибиотиков, не действующих на микроорганизм, обозначается символом (R).

Бактериологический анализ представляет особую ценность в определении чувствительности к антибиотикам, поскольку основной проблемой в борьбе с хламидией, микоплазмой, уреаплазмой и др. остается подбор действенного лечения, не приносящего вред организму и не ударяющего по карману пациента.

Таблица: альтернативный пример результатов бак-посева с выявлением эффективных антибиотиков

Правильная подготовка к бактериологическому анализу – залог достоверного результата

Бактериологическому анализу может подвергаться любой биологический материал, взятый у человека (кожа, кровь, сперма, слизистые ротовой полости, дыхательных и мочеполовых путей, желудочно-кишечного тракта, органов зрения, слуха и обоняния и др.). Чаще всего бак посев назначают гинекологи и урологи, поэтому на нем следует несколько остановиться.

Правильная подготовка к бактериологическому посеву будет залогом правильного результата, потому что в противном случае, анализ придется сдавать заново и ждать назначенное время. Как сдать кровь на стерильность из вены – это задача медработников. От больного здесь, как правило, ничего не зависит, он просто предоставляет локтевой сгиб, а медсестра производит забор в стерильную пробирку с соблюдением всех правил асептики и антисептики.

Другое дело – моча или мазок из половых путей. Здесь пациент должен обеспечить первый этап (забор), соблюдая предписанные правила. Следует заметить, что моча женщин и мужчин несколько отличается, хотя в мочевом пузыре у обоих полов она стерильна:

• У женщин при прохождении через мочеиспускательный канал может захватить небольшое количество непатогенных кокков, хотя в целом, часто остается стерильной;
• У мужчин все несколько по-другому. Передняя часть уретры может снабдить проходящую мочу находящимися там:
• дифтероидами;
• стафилококками;
• некоторыми непатогенными грамотрицательными бактериями, что и покажет впоследствии бактериологический анализ.

Однако, если они находятся в допустимой концентрации (до 10 3 КОЕ/мл), то пугаться нечего, это вариант нормы.

Чтобы избежать присутствия других микроорганизмов и максимально обеспечить стерильность взятого материала, перед сдачей анализа производится тщательный туалет половых органов (вход во влагалище у женщин закрывается ватным тампоном – защита от попадания отделяемого половых органов). Для анализа берется средняя порция мочи (начало мочеиспускания в унитаз, приблизительно 10 мл средней порции в стерильную баночку, окончание в унитаз). Пациентам необходимо знать: моча, взятая на посев, должна быть обработана не позднее, чем через два часа при хранении не выше 20°С, поэтому следует рассчитывать время на транспортировку.

Кроме этого материал на бак посев при необходимости берут из уретры и прямой кишки у мужчин, из уретры, прямой кишки, влагалища, шейки матки и цервикального канала – у женщин, но это происходит в медицинском учреждении, куда пациент должен прибыть. Подмывание, спринцевание и использование антисептических средств в таких случаях запрещено.

Другие вопросы, волнующие пациентов

Многие пациенты интересуются, сколько дней делается анализ. Однозначно на этот вопрос ответить нельзя, все зависит от того, какой материал подвергается исследованию и какой возбудитель нужно искать. Иногда ответ готов через 3 дня, иногда через неделю или даже дней 10 – 14, поскольку некоторые образцы требуют пересева на другую среду.

Не обходят стороной люди, направляющиеся на бак посев и вопрос о цене анализа. Примерная стоимость в Москве составляет порядка 800 – 1500 рублей. Разумеется, она может быть выше и зависит от широты спектра бактериологического поиска. Бесплатно анализ, наверное, можно сдать при беременности в женской консультации, или в поликлинике по особым медицинским показаниям.

Для беременных бак посев является обязательным, сдается 2 раза (при постановке на учет и в 36 недель), при этом, мазок берется не только из половых путей, но и со слизистых носа и зева. Объектом поиска в данном случае, кроме урогенитальных инфекций, будет золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus), который в послеродовом периоде может натворить много бед (гнойный мастит и др). Кроме этого, беременным в обязательном порядке делается посев мочи, соскоба влагалищного эпителия и мазки из шейки матки и цервикального канала.

Многие женщины, перед тем как отправиться на процедуру очень боятся таких страшных слов и начинают раздумывать: «А нужно ли это? Может, не пойти». Спешим заверить, что анализы абсолютно безболезненны. Мазок из шейки матки и цервикального канала берется стерильной цитощеткой, не причиняя женщине абсолютно никакой боли, зато впоследствии бак посев из ш/м и ц/к защитит и будущую мать, и плод от возможных осложнений. Объектом поиска при беременности являются возбудители хламидиоза, уреа- и микоплазмы, дрожжеподобный грибок рода Candida (обычно это Candida albicans), трихомонады и другие условно-патогенные и патогенные микроорганизмы.

Видео: ролик-демонстрация по бак-посеву из цервикального канала

Частные случаи, особо интересные сдающим анализы

Попав в половые пути патогенные микроорганизмы, через самое короткое время осваиваются и начинают свою вредную деятельность. Например, всегда патогенные гонококки (Neisseria), являющиеся виновниками довольно неприятной болезни, называемой гонореей и относящейся к ЗППП, чувствуют себя «как дома» буквально на 3 день. Они начинают активно размножаться и смело двигаться по половым путям вверх, захватывая все новые территории. Всем известно, что гонорея нынче неплохо лечится и ее уже почти никто не боится. Но для начала ее нужно найти. Основным методом поиска этой инфекции считается бак посев, культивирование, идентификация с помощью окрашивания по Граму, микроскопия.

Найденные в мазке, взятом «на флору» из половых путей, попарно лежащие «кофейные зерна» (диплококки), не указывают на наличие венерического заболевания. Такая микрофлора влагалища часто появляется в постменопаузе и ни о чем плохом не говорит. Отобранный в нестерильных условиях на предметное стекло и окрашенный метиленовым синим или по Романовскому (цитология) мазок, не может дифференцировать микроорганизм. Он может только предположить и направить пациентку на дополнительное исследование (получение изолированной культуры).

Следует заметить, что, если соскоб со слизистых мочеполовых путей, взятый для посева на уреаплазму, является не таким уж редким явлением, то посева мочи сами врачи часто избегают, поскольку с ней работать сложнее.

Трудности в диагностике создает хламидийная инфекция, приносящая большой вред не только при беременности. Кроме этого, хламидия вызывает множество заболеваний, свойственных не только женщинам, но и мужскому населению тоже, поэтому ее сеют, культивируют, изучают, определяют чувствительность к антибактериальной терапии и, таким образом, борются с ней.

При беременности вообще без бактериологического посева трудно обойтись, поскольку многие микроорганизмы, маскируясь в цитологическом мазке, могут быть пропущены. Между тем, влияние некоторых возбудителей ЗППП на плод бывает губительным. К тому же лечить беременную женщину значительно сложнее, а назначать антибиотики «на глаз» просто недопустимо.

Методы посева

Для выделения чистых культур возбудителей на первом этапе прибегают к их посеву на соответствующие среды, который проводится в специальных (стерильных!) условиях. В основном, перенос материала на среду осуществляется с помощью приспособлений, применяемых еще в 19 века великим Луи Пастером:

• Бактериальной петлей;
• Пастеровской пипеткой;
• Стеклянной палочкой.

Конечно, многие инструменты за 2 столетия претерпели изменения, на смену пришли пластиковые стерильные и одноразовые, однако и старые не остались в прошлом, продолжая и поныне служить микробиологической науке.

Первый этап получения колоний требует соблюдения определенных правил:

1. Посев осуществляется над спиртовкой в боксе, предварительно обработанном дезинфектантами и кварцеванием, или в ламинарном шкафу, обеспечивающем стерильность в рабочей зоне;
2. Одежда медработника, перчатки и среда также должны быть стерильными, поскольку обратное мешает выделению изолированных штаммов;
3. Работать в боксе нужно быстро, но аккуратно, нельзя разговаривать и отвлекаться, при этом – необходимо помнить о личной безопасности, ведь материал может быть заразным.

Выделение штаммов и изучение чистых культур

Выделение штаммов не всегда одинаково, поскольку некоторые биологические среды, находящиеся в человеческом организме требуют индивидуального подхода, например, гемокультуру (кровь) сначала в жидкой среде (соотношение 1 : 10) немного «подращивают», поскольку кровь (неразведенная) может убить микроорганизмы, а затем, через сутки или больше, пересевают на чашки Петри.

Посев мочи, промывных желудочных вод и других жидких материалов тоже имеет свои особенности, где для получения чистой культуры, жидкость сначала следует центрифугировать (условия – асептические!), а уж затем сеять, причем не саму жидкость, а ее осадок.

Культивирование и выращивание колоний осуществляют на чашках Петри или помещают сначала в жидкую среду, разлитую в стерильные флакончики, а затем изолированные колонии еще раз высевают, но уже на скошенный агар и помещают материал на сутки в термостат. Убедившись в чистоте полученной культуры, штаммы переносят на предметное стекло, делают мазок и окрашивают по Граму (чаще всего), Цилю-Нильсену и др. и для дифференцировки изучают морфологию микроба под микроскопом:

• Размер и форму бактериальной клетки;
• Наличие капсул, жгутиков, спор;
• Тинкториальные свойства (отношение микроорганизма к окрашиванию)*.

*Читатель, вероятно, слышал о таком возбудителе, как бледная трепонема? Это – возбудитель сифилиса, а ее название (бледная) поэтому и появилось, что она плохо воспринимает краски и остается слегка розоватой при окрашивании по Романовскому. Микроорганизмы, невоспринимающие анилиновые красители называются грамотрицательными, а воспринимающие – грамположительные. Грамотрицательным бактериям придают розовый или красный цвет при окраске по Граму дополнительные красители (фуксин, сафранин).

Бак посев можно назвать древним анализом, однако его популярность от этого отнюдь не падает, хотя современная бактериология имеет возможности выделения не только штаммов, но и отдельной клетки из него, которая называется клоном. Однако для получения клона необходим специальный прибор – микроманипулятор, который в обычных лабораториях отсутствует, поскольку применяется, в основном, в научно-исследовательских целях (генетические исследования).