Микробиологическая диагностика хламидиоза
Таксономия: порядок Chlamydiales, семейство Chlamydaceae, род Chlamydia. Род представлен видами С.trachomatis, C.psittaci,C.pneumoniae.
Болезни, вызываемые хламидиями, называют хламидиозами. Заболевания, вызываемые C. trachomatis u C. pneumoniae, — антропонозы. Орнитоз, возбудителем которого является С. psittaci, — зооантропонозная инфекция.
Морфология хламидий: мелкие, грам «-» бактерии, шаровидной формы. Не образуют спор, нет жгутиков и капсулы. Клеточная стенка: 2-х слойная мембрана. Имеют гликолипиды. По Граму – красный цвет. Основной метод окраски – по Романовскому – Гимзе.
2 формы существования: элементарные тельца (неактивные инфекционные частицы, вне клетки); ретикулярные тельца (внутри клеток, вегетативная форма).
Культивирование:Можно размножать только в живых клетках. В желточном мешке развивающихся куриных эмбрионов, организме чувствительных животных и в культуре клеток
Ферментативная активность: небольшая. Ферментируют пировиноградную кислоту, синтезируют липиды. Не способны синтезировать высокоэнергетические соединения.
Антигенная структура: Антигены трех типов: родоспецифический термостабильный липополисахарид (в клеточной стенке). Выявляют с помощью РСК; видоспецифический антиген белковой природы (в наружной мембране). Обнаруживают с помощью РИФ; вариантоспецифический антиген белковой природы.
Факторы патогенности.С белками наружной мембраны хламидий связаны их адгезивные свойства. Эти адгезины обнаруживают только у элементарных телец. Хламидии образуют эндотоксин. У некоторых хламидий обнаружен белок теплового шока, способный вызывать аутоиммунные реакции.
Резистентность.Высокаяк различным факторам внешней среды. Устойчивы к низким температурам, высушиванию. Чувствительны к нагреванию.
С. trachomatis -возбудитель заболеваний мочеполовой системы, глаз и респираторного тракта человека.
Трахома— хроническое инфекционное заболевание, характеризующееся поражением конъюнктивы и роговицы глаз. Антропоноз. Передается контактно- бытовым путем.
Патогенез: поражает слизистую оболочку глаз. Он проникает в эпителий конъюнктивы и роговицы, где размножается, разрушая клетки. Развивается фолликулярный кератоконъюнктивит.
Диагностика: исследование соскоба с конъюнктивы. В пораженных клетках при окраске по Романовскому—Гимзе обнаруживают цитоплазматические включения фиолетового цвета, расположенные около ядра — тельца Провачека. Для выявления специфического хламидийного антигена в пораженных клетках применяют также РИФ и ИФА. Иногда прибегают к культивированию хламидий трахомы на куриных эмбрионах или культуре клеток.
Лечение: антибиотики (тетрациклин) и иммуностимуляторы (интерферон).
Урогенитальный хламидиоз— заболевание, передающееся половым путем. Это — острое/хроническое инфекционное заболевание, которое характеризуется преимущественным поражением мочеполового тракта.
Заражение человека происходит через слизистые оболочки половых путей. Основной механизм заражения — контактный, путь передачи — половой.
Иммунитет: клеточный, с сыворотке инфицированных – специфические антитела. После перенесенного заболевания — не формируется.
Диагностика: При заболеваниях глаз применяют бактериоскопический метод — в соскобах с эпителия конъюнктивы выявляют внутриклеточные включения. Для выявления антигена хламидии в пораженных клетках применяют РИФ. При поражении мочеполового тракта может быть применен биологический метод, основанный на заражении исследуемым материалом (соскобы эпителия из уретры, влагалища) культуры клеток.
Постановка РИФ, ИФА позволяют обнаружить антигены хламидии в исследуемом материале. Серологический метод — для обнаружения IgM против С. trachomatis при диагностике пневмонии новорожденных.
Лечение.антибиотики (азитромицин из группы макролидов), иммуномодуляторы, эубиотики.
Профилактика.Только неспецифическая (лечение больных), соблюдение личной гигиены.
Венерическая лимфогранулема— заболевание, передающееся половым путем, характеризуется поражением половых органов и регионарных лимфоузлов. Механизм заражения — контактный, путь передачи — половой.
Иммунитет: стойкий, клеточный и гуморальный иммунитет.
Диагностика:Материал для исследования — гной, биоптат из пораженных лимфоузлов, сыворотка крови. Бактериоскопический метод, биологический (культивирование в желточном мешке куриного эмбриона), серологический (РСК с парными сыворотками положительна) и аллергологический (внутрикожная проба с аллергеном хламидии) методы.
Лечение.Антибиотики — макролиды и тетрациклины.
Профилактика:Неспецифическая.
С. pneumoniae — возбудитель респираторного хламидиоза, вызывает острые и хронические бронхиты и пневмонии. Антропоноз. Заражение – воздушно-капельным путем. Попадают в легкие через верхние дыхательные пути. Вызывают воспаление.
Диагностика: постановка РСК для обнаружения специфических антител (серологический метод). При первичном заражении учитывают обнаружение IgM. Применяют также РИФ для обнаружения хламидийного антигена и ПЦР.
Лечение: Проводят с помощью антибиотиков (тетрациклины и макролиды).
С. psittaci — возбудитель орнитоза — острого инфекционного заболевания, которое характеризуется поражением легких, нервной системы и паренхиматозных органов (печени, селезенки) и интоксикацией.
Зооантропоноз. Источники инфекции – птицы. Механизм заражения – аэрогенный, путь передачи – воздушно- капельный. Возбудитель – через слиз. оболочки дыхат. путей, в эпителий бронхов, альвеол, размножается, воспаление.
Диагностика:Материал для исследования — кровь, мокрота больного, сыворотка крови для серологического исследования.
Применяют биологический метод — культивирование хламидий в желточном мешке куриного эмбриона, в культуре клеток. Серологический метод. Применяют РСК, РПГА, ИФА, используя парные сыворотки крови больного. Внутрикожная аллергическая проба с орнитином.
Лечение: антибиотики (тетрациклины, макролиды).
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:
Лучшие изречения: Только сон приблежает студента к концу лекции. А чужой храп его отдаляет. 8754 — | 7489 — или читать все.
91.146.8.87 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.
Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно
ХЛАМИДИОЗЫ — разнообразные по патогенезу и клиническим проявлениям распространенные заболевания человека и животных.
Хламидии — грамотрицательные бактерии с облигатным внутриклеточным паразитизмом. Биологическое своеобразие хламидий, выражающееся в энергозависимом паразитизме и уникальном цикле развития, определяет самостоятельное положение этих микроорганизмов в системе прокариотов.
Хламидии выделены в отдельный порядок Chlamydiales, включающий одно семейство Chlamydiaceae, содержащее один род Chlamydia, состоящий из 3 видов: C. trachomatis, C. psittaci, C. pneumoniae.
Вид C. trachomatis — микроорганизмы, вызывающие заболевания, главным образом, у человека (антропонозные хламидиозы). Они обусловливают разнообразную патологию урогенитального тракта, глаз и связанную с ней хламидийную инфекцию иной локализации.
Вид С. psittaci — включает микроорганизмы, первично поражающие животных. У человека они могут вызвать зоонозные хламидиозы (орнитоз, генерализованные инфекции, связанные с сельскохозяйственными и домашними животными).
Вид C. pneumoniae — включает микроорганизмы, вызывающие респираторную патологию, передающуюся от человека к человеку. Возбудитель недостаточно изучен.
Хламидии имеют две стадии жизненного цикла: одна — инфекционная стадия, элементарного тельца (ЭТ). Эта форма приспособлена к внеклеточному существованию; другая — ретикулярное тельце (РТ) — внутриклеточная практически неинфекционная стадия, лабильна, обладает выраженной метаболической активностью. ЭТ имеют размеры 0,3 мкм, содержат нуклеоид, в клеточной стенке имеется слой — аналог пептидогликана грам/- бактерий. Эта форма проникает в клетку при фагоцитозе. Из поверхностных мембран клетки хозяина вокруг этой маленькой частицы образуется вакуоль и ЭТ превращается в крупное ретикулярное тельце (диаметр 0,5-1 мкм). Внутри образованной вакуоли РТ многократно делится. В конечном счете вся эта вакуоль через 8-12 циклов деления заполняется этими частицами и превращается во включение (микроколонию). На последней операции образуется ЭТ нового поколения. Затем мембрана, ограничивающая микроколонию, повреждается и хламидии выходят в цитоплазму и далее за пределы клетки. Помимо ЭТ и РТ имеются промежуточные или переходные формы хламидий, которые образуются на двух стадиях цикла развития, на ранней при преобразовании ЭТ в РТ и на поздней — РТ в ЭТ.
Хламидии чувствительны к антибиотикам тетрациклинового ряда, макролидам (эрит-ромицин, рифампицин).
Хламидии имеют сложную антигенную структуру. Выделяют три основных антигенных комплекса. Родоспецифический термостабильный, липополисахаридный комплекс, характерный для представителей рода, видоспецифические и типоспецифические термолабильные белковые фракции. Видоспецифический антиген определяет принадлежность штаммов к соответствующему виду. Типоспецифические антигены позволяют дифференцировать различные серовары (серотипы) хламидий внутри вида.
Вид C. psitacci объединяет возбудителей болезней птиц: орнитоз и пситаккоз (инфи-цировано до 140 видов птиц) и некоторых млекопитающих (экзогенные аборты, пневмонии и др.). Возбудитель передается человеку от птиц и животных, вызывает разнообразную форму патологии (поражения легких, заболевания нервной системы, гепатолиенальный синдром). Среди генерализованных форм летальность достигает 20%.
Вид C. trachomatis имеет наибольшую социально-медицинскую значимость. Он весьма неоднороден и представлен 15 серотипами, относящимися к 3 биоварам.
Биовар 1 — возбудитель трахомы, известный с древности. Это хронический кератоконьюнктивит, протекающий с воспалением коньюнктивы и роговицы, образованием рубцов и слепотой. До настоящего времени в ряде стран трахома интенсивно распространена. На территории бывшего союза ликвидирована в 60-е годы. В мире поражено трахомой 400 млн. человек.
Биовар 2 — возбудитель венерической лимфогранулемы. Заболевание передается половым путем. Развивается гнойный паховый лимфаденит. Активно циркулирует в Юго-Восточной Азии. Выделяется и у нас (завозные случаи).
Биовар 3 — возбудитель урогенитальных и экстрагенитальных хламидиозов: пневмоний новорожденных и младенцев, коньюнктивитов у новорожденных, коньюнктивитов у взрослых (так называемых «бассейновых»).
Проблема заболеваний мочеполовых органов, вызываемых C. trachomatis за последние десятилетия приобрела чрезвычайно важное значение, что связано с высоким распространением данного вида инфекции и значительным числом развивающихся после нее осложнений. Крайне высок удельный вес хламидиозных уретритов и цервицитов среди таковых другой природы, а также различных форм восходящей генитальной хламидийной инфекции. Так, восходящая инфекция C. trachomatis может приводить к развитию эндометрита.
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА
1. Бактериоскопический метод — выявление хламидий, их морфологических структур и антигенов в пораженных клетках (клиническом материале).
Материал — соскобные препараты с доступных исследованию слизистых оболочек мочеполового тракта ( уретра, шейка матки и т.п.) и других органов (конъюнктива, прямая кишка и пр.) при экстрагенитальных формах. Из материала готовят мазки, которые окрашивают по Романовскому-Гимзе. Цитоплазматические включения хламидий (тельца Гальберштедтера-Провачека) содержат или крупные ретикулярные тельца или мелкие элементарные тельца. По цвету и внутренней структуре отличаются от ядра клетки и цитоплазмы. Метод характеризуется сравнительно низкой чувствительностью, позволяет диагностировать 10-20% случаев урогенитальной инфекции; при хламидийной патологии глаз чувствительность 90-100%.
Применение люминисцирующих поликлональных и моноклональных антител для выявления антигенов хламидий в цитоплазматических включениях в соскобных препаратах урогенитального тракта значительно увеличивает чувствительность и специфичность метода. Используется как прямой, так и непрямой иммунофлуоресцентный метод. При люминесцентной микроскопии антигены хламидий выявляют на красном или оранжевом фоне (при контрастировании синькой Эванса или родамином) цитоплазмы эпителиальных клеток в виде внутриклеточных включений ярко-зеленого цвета. По информативности и чувствительности уступает только бактериологическому методу.
При диагностике орнитоза и других зоонозных хламидиозов бактериоскопический метод не применяется.
2. Бактериологический метод. Выделение хламидий из инфекционного материала проводится заражением куриных эмбрионов, лабораторных животных или клеточных культур с последующей индикацией возбудителя. Материал тот же, что и при бактериоскопии. При орнитозе — кровь или мокрота. Кровь из вены (не менее 5 мл) исследуют в первые 7-10 дней заболевания, мокроту — до 14 дня заболевания. Для удаления сопутствующей микрофлоры добавляют антибиотики, не действующие на хламидии. (стрептомицин, нистатин, гентамицин). При заражении куриного эмбриона исследуемый материал вводят в желточный мешок 6-7 суточного развивающегося эмбриона. Обычно заражают 8-10 эмбрионов на 1 исследуемую пробу. При отсутствии специфической гибели эмбрионов спустя 4-10 суток после заражения под контролем бактериоскопии делают до 3 слепых пассажей.
Идентификация. Первичную идентификацию хламидий проводят на основании обнаружения типичных цитоплазматических включений, содержащих элементарные, ретикулярные тельца, и выявлении в их составе родоспецифического антигена (мазки-отпечатки из желточных мешков куриных эмбрионов — окраска по Маккиавелло, прямая и непрямая РИФ). При выделении хламидий в культурах клеток (HeLa), идентификация основана на выявлении в зараженных клетках типичных цитоплазматических включений (микроскопия с окраской по Гимзе), и родоспецифического антигена (РИФ). Оценку заражения клеток проводят через 48 — 72 часа.
При диагностике орнитоза кроме культур клеток можно заражать лабораторных животных в мозг или внутрибрюшинно.
3. Серологический метод. Антитела выявляют в сыворотке крови (исследуют 2-3 раза с интервалом 10-14 дней) и секретах половых органов. Используют для диагностики РСК, РПГА, РИФ, ИФА. Диагностически значимыми являются титры 1:32-1:64 при урогенитальных хламидиозах, 1:160 — при генерализованных инфекциях. Наиболее достоверным является нарастание титра антител в 4 и более раза. Специфические Ig M и Ig A обнаруживаются в секретах половых желез в титрах >1:8, Ig G — >1:256.
4. Кожно-аллергическая проба. Используется при диагностике орнитоза с орнитозным аллергеном. Внутрикожная проба становится положительной с первых дней заболевания у 87-95% больных, сохраняясь до года и более.
МИКОПЛАЗМЫ. МИКОПЛАЗМОЗЫ
Микоплазмы — мельчайшие среди живущих прокариотических микроорганизмов, способные к самостоятельному метаболизму и репродукции. Относятся к отдельному классу Mollicutes («мягкокожие»)
В настоящее время описано свыше 100 видов М., отнесенных к трем порядкам. Наибольшее значение в патологии человека имеют М. семейства Micoplasmataceae. В состав этого семейства входят 2 рода:
1. Mycoplasma (более 70 видов);
2. Ureoplasma (2 вида).
Среди микоплазм имеются как свободноживущие (сапрофиты), так и поражающие млекопитающих, птиц, насекомых, а также растения. Размер М. 0,15 — 0,3 мкм. Они полностью лишены клеточной стенки и ее дериватов. Однако они способны размножаться на бесклеточных питательных средах, где образуют характерные колонии.
Клетки М. полиморфные — шарообразные, мелко зернистые, звездчатые, нитевидные. Размножение — бинарное деление, возможна фрагментация нитей, почкование. Имеются микоплазмы, обладающие скользящей подвижностью (подобно амебе), некоторые обладают жгутиками.
М. окружена 3-хслойной липопротеиновой мембраной, которая состоит из стериновых липидов, что отличает их от других прокариотов и сближает с эукариотами. Отсюда потребность микоплазм в стироле для роста и синтеза мембран. ЦПМ выполняет одновременно функции клеточной стенки и собственно мембраны и несет ряд важнейших физиологических функций: регулирует процессы метаболизма, энергетический обмен, рецепцию токсинов, обеспечивает адсорбцию эритроцитов, сперматозоидов, эпителиальных и др. клеток.
Отсутствие клеточной стенки определяет отличительные свойства микоплазм: чрезвычайную пластичность, полиморфизм, чувствительность к лизису под влиянием осмотического шока, алкоголя, детергентов, фильтруемость через мембранные фильтры, устойчивость к антибактериальным препаратам, действующим на клеточную стенку.
На агаризованных питательных средах М. образуют небольшие колонии похожие на яичницу-глазунью (10-200 мкм) в зависимости от вида.
Недостаток белков — ферментов ограничивает число метаболических путей, поэтому микоплазмы крайне чувствительны к питательным средам, в состав которых обязательно должны входить: пуриновые и пиримидиновые основания, аминокислоты, витамины, липиды, в том числе стероиды.
Паразитируя в организме хозяина, они потребляют эти вещества непосредственно из тканей организма-хозяина.
Заболевания, вызываемые микоплазмами — микоплазмозы относятся к одним из наиболее часто встречающихся заболеваний. Это ОРЗ до 10% всех случаев (основные возбудители M. pneumoniae и M. hominis); пневмонии — около 20% всех пневмоний (M. pneumoniae, hoominis); внереспираторные проявления респираторного микоплазмоза: миокардиты, перикардиты, неврологические проявления (неврит, менингоэнцефалит и др.), нефрит, отит, синусит.
Урогенитальные микоплазмозы занимают значительное место среди болезней, передающихся половым путем. Основные возбудители: М. hominis, M. genitalium, M. fermentans. Микоплазменная инфекция у мужчин может быть причиной уретритов, простатитов, у женщин — вагинитов, цевицитов, осложнений беременности (самопроизвольные выкидыши, преждевременные роды, послеродовой сепсис). С микоплазменной инфекцией многие связывают нарушение репродуктивной функции мужчин и женщин.
ОБЩАЯ И ЧАСТНАЯ ВИРУСОЛОГИЯ
91. Патогенные хламидии и микоплазмы ( возбудителиурогенитальногохламидиоза, урогенитального микоплазмоза и уреаплазмоза ). Морфология, тинкториальные свойства, биохимические особенности, антигенная структура, эпидемиология, патогенез и клиника. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Род Chlamydia и род Chlamydophila.
Представители семейства Chlamydiaceae (хламидии) являются патогенными облигатными внутриклеточными бактериями, паразитирующими в чувствительных клетках теплокровных (млекопитающих, птиц, человека и др.).
Они близки по структуре и химическому составу к классическим бактериям. Для них характерно сохранение морфологической сущности на протяжении всего жизненного цикла, деление вегетативных форм, наличие клеточной стенки, содержание ДНК и РНК, энзиматическая активность, чувствительность к антибиотикам широкого спектра, наличие общего родоспецифического антигена.
В то же время хламидии по размерам меньше классических бактерий, имеют небольшой геном, являются облигатными внутриклеточными паразитами с уникальным циклом развития. Они не способны синтезировать высокоэнергетические соединения и обеспечивать собственные энергетические потребности ( энергозависимые паразиты), что и определяет их облигатный паразитизм.
С учетом своих особенностей хламидии занимают самостоятельное (особое) положение среди других микроорганизмов — прокариот. Для человека имеют значение преимущественно представители двух родов — Chlamydia и Chlamydophila. Наибольшее значение имеют три вида.
Chlamydia trachomatis , различные серотипы которого вызывают трахому, венерическую лимфогранулему и наиболее распространенные урогенитальные хламидиозы.
Chlamydophila psittaci вызывает орнитоз и зоонозные хламидиозы.
Chlamydophila pneumoniae вызывает антропонозные пневмонии, ОРЗ, с этим возбудителем связывают развитие некоторых форм бронхиальной астмы, атеросклероза.
Клеточный цикл развития хламидий имеет две основных формы — элементарные тельца (ЭТ) — инфекционная форма и ретикулярные тельца (РТ) — вегетативная форма. Сферические ЭТ значительно меньше размерами (менее 300 нм в диаметре), имеют более жестную электронно- плотную структуру, метаболически мало активны, адаптированы к кратковременному внеклеточному существованию.
Цикл развития хламидий осущесвляется в цитоплазматическом включении — фагосоме (вакуоле), куда ЭТ попадают путем стимулирования эндоцитоза. В процессе адсорбции и эндоцитоза участвуют термолабильные эффекторные белковые поверхностные антигены хламидий. ЭТ подавляют фагосомо — лизосомальное слияние и преобразуются при участии главного поверхностного протеина в РТ, которые обладают активным метаболизмом, более крупными размерами и активным бинарным делением. Цикл размножения заканчивается обратным переходом РТ в ЭТ, разрывом мембран включения и ограничивающих мембран клетки хозяина, выходом ЭТ из клеток, далее ЭТ инфицируют новые клетки. Тельца включений выявляются в клетках при помощи световой и иммунолюминесцентной микроскопии.
Кроме того, хламидии способны образовывать L — формы, персистентные формы.
Хламидии не растут на питательных средах самого сложного состава (это сближает их по свойствам с риккетсиями и особенно — с вирусами), для их культивирования могут быть использованы лабораторные животные и куриные эмбрионы (биопроба) и особенно чувствительные линии клеток животных — чаще клетки McCoy (чаще с обработкой цитостатиками для повышения чувствительности), которые считались “золотым стандартом” диагностики.
Способны самостоятельно синтезировать нуклеиновые кислоты, некоторые белки и липиды. Являются энергетически зависимыми от хозяина эндопаразитами. Chlamydia trachomatis обладает гликоген — синтетазной системой (гликоген содержится и выявляется при определенных методах окраски во включениях), синтезирует предшественники фолиевой кислоты и соответственно биохимической активности чувствителен к сульфаниламидам.
1. Выделяют поверхностный родоспецифический антиген (ЛПС), локализующийся на наружной мембране клеточной стенки. ЛПС имееи две антигенные детерминанты, одна из них специфична для всего рода, другая перекрестно реагирует с некоторыми другими грамотрицательными бактериями (сальмонеллы серовара minnesota), термостабилен.
2. МОМР — главный белок наружной мембраны несет функцию структурного белка и порина. Включает термолабильные белковые детерминанты , обладающие видо — , типо — и сероварной специфичностью.
1. Эндотоксин (липополисахарид), подобный эндотоксинам грамотрицательных бактерий.
2. Экзотоксины — термолабильные субстанции.
3. Антигены клеточной поверхности, подавляющие защитные реакции.
Факторы патогенности хламидий препятствуют фагосомо — лизосомальному слиянию в фагоцитах.
Краткая характеристика распространения.
Урогенитальные хламидиозы — наиболее распространенные формы хламидиозов. В крупных странах (США, Россия) ежегодно регистрируют несколько миллионов случаев, в мире — от 50 до 90 млн. случаев. Скудность начальных проявлений и тяжелые последствия урогенитальных хламидиозов, особенно у женщих (нарушения репродуктиной сферы, инфекционные осложнения), предъявляют особые требования к своевременной лабораторной диагностике. Хламидии сероваров D — K Chlamidia trachomatis, вызывающие урогенитальные хламидиозы, передаются от человека к человеку половым путем. Бессимптомное носительство наблюдается не менее чем у 5 % мужчин и 10% женщин. Отдельные серотипы этого возбудителя вызывают такие распространенные в прошлом заболевания как трахома (сопровождается поражениями конъюнктивы и прилегающих тканей глаза, часто приводит к катарактам и слепоте) и венерическая лимфогранулема (регистрируют преимущественно в слаборазвитых странах Азии, Африки и Латинской Америки с теплым климатом).
Орнитоз — хламидийная инфекция, вызываемая C.psittaci. Человек заражается от птиц — основных хозяев этого возбудителя воздушно — пылевым и воздушно — капельным путем. В условиях города основную опасность представляют голуби (от 20% до 100% инфицировано этим возбудителем, чаще с ними контактируют дети. В домашних условиях источником могут быть канарейки и особенно попугаи (вызывают наиболее тяжелую форму — пситтакоз). Орнитоз часто протекает как тяжелая интерстициальная пневмония. Кроме этого, серотипы этого возбудителя вызывают зоонозные хламидиозы (например, так называемый вирусный аборт овец, хламидиозы крупного рогатого скота и др.), при контакте с больными животными могут развиваться различные формы хламидиозов у людей. Клинико — эпидемиологические особенности зоонозных хламидиозов у людей изучены недостаточно.
Бронхопневмонии , вызываемые C.pneumoniae. Это антропонозные инфекции, передаваемые от человека к человеку, большая часть случаев протекает субклинически. Возникают поражения верхних дыхательных путнй с последующим развитием бронхопневмонии. Это распространенные инфекции (антитела к C.pneumoniae выявляют почти у половины взрослого населения), однако диагностируются до настоящего времени плохо. С этим возбудителем связывают развитие отдельных форм бронхиальной астмы и атеросклероза.
С учетом многообразия клинических проявлений и необходимостью дифференциации различных клинических форм хламидиозов (прежде всего генитальных и экстрагенитальных) особое значение приобретает лабораторная диагностика.
Золотой стандарт — метод культивирования в культурах клеток применяется очень редко в связи с трудоемкостью и длительностью культивирования, необходимостью работы с инфекционным материалом, этот метод по чувствительности уступает ПЦР, требует быстрой доставки материала для исследования.
Применяемые лабораторные методы можно разделить на две основные группы — методы выявления антител и методы выявления антигенов.
Методы выявления антител наиболее эффективны при генерализованных формах хламидиозов, сопровождающихся выработкой антител в высоких титрах (орнитоз), и мало эффективны при локальных (особенно хронических) формах (урогенитальные хламидиозы). Большинство методов выявляет антитела к группоспецифическому липополисахариду хламидий, что не позволяет определить вид хламидий. Среди используемых методов:
— РСК — достаточно специфичный, но мало чувствительный метод;
— РНГА — более эффективный метод для диагностики текущего инфекционного заболевания;
— ИФА — наиболее чувствительный метод серологической диагностики. Некоторые варианты тест — систем ИФА позволяют дифференцировать C.pneumoniae от хламидий других видов;
— РНИФ — обладает наибольшей степенью видоспецифичности.
Методы выявления возбудителя, его ДНК и антигенов.
1. Цитологические методы с окраской мазков по Романовскому — Гимзе и другими методами мало чувствительны и специфичны, имеют преимущественно историческое значение.
2. Метод флюоресцирующих антител (МФА) с моноклональными антителами (МКА) к группоспецифическому липополисахариду хламидий — наиболее распространенный, чувствительный и специфичный метод, позволяет выявлять локализацию возбудителя (урогенитальные мазки), морфологию (характер гранул, преобладание РТ или ЭТ). Метод требует высокой квалификации микроскописта и качества мазка — отпечатка ( достаточное количество клеток с учетом внутриклеточного расположения возбудителя).
3. ИФА для выявления антигена применяется относительно реже, требует большого количества материала (соскоб), связана с получением суспензии и опасностью инфицирования персонала.
4. ПЦР для выявления ДНК хламидий — наиболее чувствительный метод. Однако и при нем возможны ложноположительные (при недостаточной чистоте работы — при контаминации) и ложноотрицательные (наличие в пробах материала ингибиторов Tag — полимеразы) результаты.
Недостатки чувствительных методов выявления антигенов возбудителя — возможность получения положительных результатов даже через 1 — 1,5 месяца после излечения. Нужна полная замена эпителия слизистой, содержащего поверхностные антигены разрушенных хламидий, для получения отрицательных результатов. Особенно это относится к ИФА, ПЦР, для МФА — в меньшей степени (этот метод позволяет оценить морфологию включений хламидий).
Лечение и профилактика.
Хламидии — внутриклеточные паразиты. Применяют антибактериальные препараты, проникающие в клетки, чаще доксициклин или сумамед (азитромицин). Эффективному лечению часто препятствует одновременное наличие у больных гонококков и трихомонад (в трихомонадах хламидии могут находиться внутриклеточно). Эффективность современных методов лечения урогенитальных хламидиозов не превышает в идеале 98 — 99%, т.е. часть пациентов эффективно освободить от хламидий не удается, даже после нескольких циклов лечения. У этих больных часто развиваются дисбактериозы, присоединяется кандидоз, снижается резистентность к различным инфекционным агентам.
Эффективных методов специфической профилактики нет.
Род Mycoplasma и род Ureaplasma
Микоплазмы — самые мелкие прокариотические микроорганизмы, не имеющие клеточной стенки (это придает им сходство с L — формами бактерий) и способные к паразитированию на мембранах эукариотических клеток. Способность персистировать на мембранах клеток связана с наличием сходства структуры и состава цитоплазматической мембраны микоплазм с мембранами клеток эукариот и использовании микоплазмами их компонентов (прежде всего холестерина и фосфолипидов) для построения собственных структур. Микоплазмы имеют трехслойную цитоплазматическую мембрану, обеспечивающую целостность микробных клеток и частично замещающую в функциональном отношении отсутствующую клеточную стенку.
Современная систематика относит представителей семейства Mycoplasmatacea к классу Mollicutes (молликут — “мягкокожих”), объединяющему микоплазмы, уреаплазмы, ахолеплазмы (первые три рода молликут встречаются у человека, среди них встречаются патогенные и сапрофитические виды), спироплазмы и анаэроплазмы.
Основные характеристики молликут — отсутствие истинной клеточной стенки, мелкая кокковидная форма, паразитизм на мембранах эукариотических клеток, рост на плотных средах в виде мелких врастающих в агар колоний с приподнятым центром (“яичница — глазунья”), абсолютная резистентность к пенициллинам и другим действующим на синтез клеточной стенки антибиотикам. Характеризуются малым размером генома, низким содержанием Г+Ц в ДНК. Имеют от 104 до 113 нуклеотидов в 5S рРНК.
Представители рода микоплазм — паразиты и возбудители заболеваний (микоплазмозов) широкого круга млекопитающих, птиц, человека. Представители некоторых видов встречаются на растениях и в насекомых. Известно около 100 видов микоплазм, число новых видов продолжает увеличиваться. 12 видов встречаются у человека, из них наибольшее значение имеют M.pneumoniae (вызывает в основном пневмонии и ОРЗ), M.hominis, M.genitalum, M.fermentans (при вызываемых ими инфекциях преобладают урогенитальные поражения). В составе рода Ureaplasma выделено пять видов. Штаммы, выделенные от людей, составляют вид U.urealyticum, от КРС — U.diversum, от птиц — U.gallorale, от кошек — U.cati и U.felinum.
Наиболее типичны мелкие кокковидные формы, выражен полиморфизм.
Культуральные и биохимические свойства
Микоплазмы прихотливы к условиям культивирования. В составе сред необходимы холестерин и стерины, нативные сыворотки, витамины, соли. Основным источником энергии являются углеводы (особенно глюкоза) или аминокислоты (аргинин). Для усиления восстановительных свойств сред добавляют L- цистеин.
Используют различные варианты жидких, полужидких и плотных питательных сред, включающих гидролизаты мяса, казеина, ферментативный пептон, аутолизат пекарских дрожжей, сыворотку крови лошадей (больше всего холестерина), основной субстрат — глюкозу (для глюкозоферментирующих микоплазм), аргинин (для аргинин- утилизирующих микоплазм), мочевину (для уреаплазм), селективные антибиотики (пенициллин и его синтетические аналоги, амфотеррицин, нистатин или низорал, для уреаплазм — линкомицин), индикатор рН (бромтимоловый синий или феноловый красный).
Оптимум температуры для культивирования от + 35 до +37С. Оптимум рН для уреаплазм и аргинин- утилизирующих микоплазм — 6,0 — 6,5. При росте уреаплазм, обладающих ферментом уреазой, происходит расщепление мочевины до аммиака с повышением рН (сдвиг в щелочную сторону) и с изменением цвета среды с бромтимоловым синим из желто — лимонного до зеленого без образования значительного осадка и без помутнения среды. Аналогично происходит изменение цвета сред при росте аргинин- утилизующих микоплазм на средах с добавлением аргинина.
Оптимум рН для глюкозоверментирующих микоплазм (M.genitalium, M.fermentans, M.pneumoniae) — около 8,0. Эти микоплазмы ферментируют глюкозу до углекислого газа со сдвигом рН в кислую сторону и изменением цвета среды с зеленого на желто — лимонный.
Колонии уреаплазм (ранее называли Т- микоплазмами от “tiny -маленький”) значительно меньше колоний классических микоплазм, на средах с добавлением сульфата марганца их колонии окрашиваются в золотисто — коричневый цвет, в отличии от микоплазм уреаплазмы мало чувствительны к небольшим дозам линкомицина (15 мкг/ мл).
Микоплазмы характеризуются выраженной гетерогенностью и изменчивостью антигенной структуры (антигенный полиморфизм). Известно 16 серотипов U.urealyticum, разделенных на серогруппы А и В. Степень гомологии серотипов существенно отличается. Часто выделяют от больных смешанные культуры различных серотипов. Выделяют биовары уреаплазм, отличающиеся по вирулентности и строению гена основного фермента — уреазы. Аналогичная динамичность и гетерогенность антигенной структуры и наличие различных сероваров характерна и для различных видов классических микоплазм. По биохимическим и в определенной мере антигенным свойствам среди микоплазм имеются виды — двойники (например, M.pneumoniae и M.genitalium). Среди антигенов выделяют белки — адгезины, фосфо — и гликолипиды, полисахаридные компоненты.
1. Адгезины (обеспечивают взаимодействие с клетками хозяина).
2. Эндотоксины (не тождественны ЛПС грамотрицательных бактерий).
3. Гемолизины (особенно — у M.pneumoniae).
4. Экзотоксины (плохо изучены и известны у немногих видов).
5. Ферменты — фосфолипаза А, аминопептидазы, протеазы, нейраминидаза.
Микоплазмы — мембранные паразиты и способны адсорбироваться на различных эукариотических клетках. Этому способствует подвижность патогенных микоплазм, связанная с хемотаксисом и наличием микроворсинок. Микоплазмы способны тесно связываться с мембранами эукариотической клетки, вступать в межмембранное взаимодействие, обмениваться мембранными компонентами (в том числе использовать холестерин и стенолы для построения собственных клеток), оказывать разнообразное влияние на клетки. Коротко остановимся на основных эффектах действия микоплазм на различные клетки.
1. Взаимодействие с фагоцитирующими клетками вызывает цитопатический или цитотоксический эффект и гибель фагоцитов или приводит к длительной персистенции микоплазм в фагосомах фагоцитов.
2. Воздействие микоплазм на макрофаги приводит к нарушению их функций.
3. Персистенция микоплазм на мембранах лимфоидных клеток оказывает существенное влияние на их функции, в том числе непосредственное деструктивное воздействие на иммунокомпетентные клетки (M.fermentans оказывает СПИДо — подобное действие на иммунную систему).
4. Микоплазмы действуют на эритропоэз, т.е. на гомеостаз организма.
5. Обмен антигенными компонентами мембран с клетками хозяина обеспечивает антигенную мимикрию и развитие аутоиммунных реакций.
6. Отсутствие клеточной стенки и частоя локализация микоплазм в инвагинатах мембран клеток объясняет их слабую иммуногенность и защиту от действия антител. Этому способствует и высокая антигенная изменчивость молликут.
7. Микоплазмы способны воздействовать на хромосомный аппарат клеток хозяина (на соматические и половые клетки), вызывая хромосомные абберации.
8. Ряд продуктов метаболизма оказывает токсическое воздействие на инфицированные клетки. Так, глюкозоферментирующие микоплазмы резко снижают рН и оказывают этим деструктивное действие на эпителиальные клетки.
Частота распространения отдельных видов микоплазм.
Среди урогенитальных молликут на первом месте уреаплазмы, на втором — M.hominis, они по частоте встречаемости уступают только хламидиям. Большинство микоплазм — возбудители оппортунистических инфекций, наиболее часто их выявляют у категорий риска (больные с воспалительными процессами гениталий, часто меняющие сексуальных партнеров и др.), у беременных. Наибольший патогенный потенциал признают за M.pneumoniae, M.fermentans, U.urealyticum, M.hominis. M.pneumoniae — один из распространенных возбудителей, вызывающих пневмонии и другие инфекционные заболевания дыхательных путей человека. Большинство выделяемых от животных микоплазм не имеет медицинского значения.
Наиболее оптимальна культуральная (бактериологическая) диагностика с использованием жидких и плотных питательных сред, особенно в сочетании с антибиотикограммой и определением титра микоплазм (уреаплазм) в нативных образцах. Преимущества этого подхода: быстрота (для уреаплазм 1-2 суток, для микоплазм — до 3 суток), простота (цветной пробирочный тест), достоверность (селективность сред, учет биохимизма возбудителей), возможность определения конценрации (титр 10000 цветообразующих единиц — ЦОЭ имеет диагностическое значение) и чувствительности к различным препаратам на основе антибиотикограммы (повышает эффективность лечения), возможность достоверного контроля эффективности лечения (растут только жизнеспособные микоплазмы).
Наиболее чувствительна ПЦР — диагностика. Однако: возможны ложно — положительные и ложно — отрицательные результаты, длительность выявления положительных результатов контроля излеченности, невозможность определения титра микоплазм (не разработаны количественные методики ) и чувствительности к препаратам.
Люминесцентная диагностика дает неудовлетворительные результаты чаще, чем при выявлении хламидий. Это связано с малыми линейными размерами возбудителей, серологической гетерогенностью и антигенной изменчивостью, возможностью перекрестных реакций между различными видами, наличием диагностических препаратов только для выявления уреаплазм и M.hominis.
Серологические методы многочисленны, однако коммерческие препараты отсутствуют, существуют проблемы в интерпретации результатов.
Лечение должно быть основано на подборе чувствительных антибиотиков (чаще применяют макролиды, тетрациклины — доксициклин) и бактериологическом контроле эффективности лечения. Имеются устойчивые к тетрациклинам, макролидам и другим антибиотикам штаммы (связано с наличием плазмид устойчивости). У микоплазм имеются специфические вирусы, в т.ч. бактериофаги. В лечебных и диагностических целях они до настоящего времени не используются.
Специфическая профилактика не разработана. Иммунитет нестойкий, серотипоспецифический.