Мазок на чувствительность к антибиотикам подготовка

Бактериологический посев – это анализ, выявляющий в том числе чувствительность патогенного микроорганизма к антибактериальным лекарственным средствам. С помощью этого метода исследования биологического материала специалисты определяют тип возбудителя инфекции, его концентрацию и патогенность, что помогает врачу назначить адекватное, эффективное для конкретного клинического случая специфическое лечение.

Что такое посев на чувствительность к антибиотикам

Посев на чувствительность, называемый еще бакпосевом на микрофлору – это вид исследования, применяемый при диагностике венерологических, гинекологических, урологических, дерматологических и других инфекционных заболеваний. После забора биологического материала производится его посев в различные питательные среды. Спустя некоторое время «разросшиеся» на нем в результате искусственного культивирования микроорганизмы тестируют на чувствительность к разным типам антибиотиков или противомикробных препаратов.

Исследование, называемое антибиотикограммой, демонстрирует, от препаратов какой фармакологической группы быстрее всего погибнет возбудитель инфекции. Кроме того, анализ определяет концентрацию патогенных микроорганизмов (выражается в КОЕ/мл, называемых колониеобразующими единицами), их резистентность (устойчивость) по отношению к медикаментозным средствам и внешним факторам. Для проведения исследования могут забираться следующие биоматериалы:

• кровь;
• урина;
• желчь;
• кал;
• сперма;
• спинномозговая жидкость;
• слизь из уретры;
• слизь из цервикального канала;
• слизь из зева;
• слизь из носоглотки;
• мокрота;
• содержимое кисты;
• содержимое очага воспаления;
• раневое отделяемое;
• грудное молоко;
• секрет простаты.

Выращивание колоний патогенных микроорганизмов на исследуемых материалах проводят в чашках Петри, либо сначала в жидкой среде, а затем на скошенном агаре в термостате на протяжении суток. После штаммы полученной культуры переносят на предметное стекло, окрашивают и изучают морфологические свойства микроорганизма под микроскопом. Внимание обращают на размер и форму клеток и их тинкториальные свойства (отношение к окрашиванию).

Показания

Бакпосев на микрофлору широко применяется в медицинской практике при диагностике инфекционно-воспалительных заболеваний (в гинекологии, урологии, венерологии, отоларингологии, хирургии и других областях), и при риске развития сепсиса (системной реакции на развивающееся воспаление). Анализ на чувствительность к антибиотикам позволяет выявить и вывести возбудителей следующих заболеваний:

• бактериальный вагинит;
• инфекционные ЗППП (заболевания, передающиеся половым путем);
• хламидиоз;
• гонорея;
• трихомониаз;
• цистит;
• кишечная инфекция;
• пневмония;
• туберкулез;
• ангина и мн. др.

При беременности

Определение чувствительности к антибиотикам при беременности проводится как минимум дважды – сразу после постановки на учет и на 36 неделе. Делается мазок из влагалища и со слизистой оболочки зева и носоглотки. Биоматериал исследуют, определяют наличие урологических и мочеполовых инфекций и золотистого стафилококка – возбудитель, провоцирующий гнойный мастит, послеродовой сепсис и др. инфекции в период после родоразрешения. При наличии показаний (заболевания почек, повышенный уровень лейкоцитов в моче и др.) могут назначаться:

• посев мочи;
• мазок из шейки матки;
• соскоб влагалищного эпителия;
• бактериальный посев из цервикального канала.

Виды исследуемых микроорганизмов

В зависимости от типа биоматериала и показаний к проведению анализа по результатам исследования выделяют следующие виды патогенных возбудителей бактериальных инфекций:

1. Слизь из носоглотки и зева: золотистый стафилококк, гемолитический стрептококк, менингококк, листерия, коринебактерия дифтерии, гемофильная палочка, синегнойные пневмококки.
2. Гнойное отделяемое, содержимое ран, биопунктат: синегнойная палочка, псевдомонада.
3. Урогенитальная слизь: бактериальная флора, возбудители мочеполовых инфекций (микоплазма, гарднерелла, уреаплазма, трихомонада, грибы, гонококк, листерия).
4. Каловые массы: тифопаратифозная бактериальная группа, кишечная группа (иерсинии, сальмонеллы, шигеллы), анаэробные возбудители пищевых инфекций, условно-патогенные возбудители кишечных инфекций.
5. Кровь исследуют на стерильность.
6. Остальные биожидкости – на обсемененность (бактериальную флору).

Подготовка к анализам

По статистике, около 80% ошибок в лабораторных исследованиях вызваны ошибками при сборе и транспортировке материалов для обследования. Как правило, забор осуществляет медицинский персонал, но некоторые биоматериалы больной собирает сам. Поэтому при подготовке к сдаче анализа необходимо соблюдать следующие общие правила:

• Во время забора биоматериала требуется исключить попадание в него антисептических или дезинфицирующих соединений, обсеменения бактериями и иными организмами. Для этого инструментарий и посуда для сбора должны быть стерильными.
• На результаты посева на антибиотики влияет прием пациентом антибактериальных и иных медикаментозных препаратов. О терапии необходимо сообщить назначившему анализ врачу, применение лекарств необходимо приостановить за срок не менее 10 суток до назначенной даты анализа.
• Материалы для обследования должны быть доставлены в лабораторию в специальных герметичных контейнерах в максимально короткие сроки. Во время транспортировки собранные биологические жидкости должны быть защищены от воздействия света, температур, механического воздействия.

Как сдавать анализ

Бактериологический посев на чувствительность к антибиотикам проводится на разных видах биоматериала. В зависимости от их типа необходимо соблюдать следующие предписания специалистов при заборе проб:

1. Сбор мочи производят по утрам, натощак, после предварительно проведенных гигиенических процедур. Необходимый объем урины составляет от 10 до 15 мл. Забор производят в специальную стерильную посуду, материал должен быть доставлен в лабораторию не позднее чем через два часа.
2. Мазок на чувствительность к антибиотикам из носоглотки или зева проводят по утрам, до приема пищи и воды и до проведения гигиенических процедур (чистки зубов и полоскания рта).
3. Сбор кала производится утром, стерильной лопаткой в стерильную посуду, необходимый объем биоматериала – до 30 мг. Недопустимо попадание мочи, использование клизмы или слабительных препаратов, замораживание. Срок доставки в лабораторию не должен превышать 3-5 часов.
4. Проба мокроты доставляется в место проведения исследования на протяжении часа после забора, который проводят натощак, после предварительной чистки зубов и полоскания рта.
5. Пробу грудного молока берут после проведения гигиенических процедур и обработки кожи вокруг соска спиртом. Перед забором материала в объеме 5 мл (в стерильную посуду) сцеживают от 15 мл жидкости. Время доставки в лабораторию не должно превышать 2 часов.
6. Мазок со слизистых влагалища и другие виды забора материала на мочеполовые инфекции. Анализ проводят не ранее чем через 2 недели после окончания менструации (точную дату определит врач на основе данных о месячном цикле). Последнее мочеиспускание должно быть проведено за два часа до взятия пробы у женщин и за 5-6 – у мужчин.
7. Объем забранной для посева крови у детей составляет 5 мл, у взрослых – 15 мл.

Сколько делается посев

Посев на флору и чувствительность к антибиотикам проводится в течение некоторого продолжительного времени (по сравнению с готовностью результатов других анализов). Выделение штаммов проводится не одинаково, потому что разные биологические среды человеческого организма требуют индивидуальных подходов. Примерные сроки результатов анализов для разных типов биоматериала:

• Кал: от 5 дней до недели.
• Урогенитальные материалы: 4-10 дней.
• Кровь: 10-14 дней (первые предварительные данные готовы через 3-4 дня).
• Слизь из зева или носоглотки: от 5 до 7 дней.
• Посев на флору: 5-10 дней.

Расшифровка

Бактериологический посев на чувствительность к антибиотику дает представление о качественной и количественной оценке исследуемого образца. Качественная оценка (наличие возбудителя) классифицируется по следующим четырем степеням роста:

1. Первая. При этой степени рост на твердой среде отсутствует, на жидкой регистрируется небольшой рост.
2. Вторая. Небольшой рост на твердой среде (до 10 колоний).
3. Третья. Значительный рост на твердой среде (10-100 колоний).
4. Четвертая. Больше 100 колоний.

При обнаружении в результате исследования условно-патогенной микрофлоры (непатогенных грамотрицательных бактерий) первые две степени относят к норме, при третьей или четвертой степени говорят о присутствии в организме микробов-возбудителей инфекции, размножение которых стало причиной возникновения и развития заболевания. При наличии в материале патогенной микрофлоры все четыре степени свидетельствуют о наличии болезни. Например, сапрофитная микрофлора в бакпосеве мочи свидетельствует об инфекции мочеполовой системы.

Количественная оценка проводится в колониеобразующих единицах (КОЕ), обозначающих объединение (сообщество) клеток бактерий, образовавших колонию. Она помогает установить степень обсемененности и проконтролировать достаточность назначенных для лечения дозировок лекарственных средств (адекватность проведенных медикаментозных назначений). Принято следующее условное соотношение КОЕ и миллилитров:

• 1 колония – это 103 КОЕ/мл.
• 1-5 колоний – это 104 КОЕ/мл.
• 5-15 колоний – это 105 КОЕ/мл.
• более 15 колоний – это 106 КОЕ/мл

Тест на чувствительность к антибиотикам, проводимый одновременно с посевом на определение возбудителя инфекции, называют антибиотикограммой. Выделив патогенный микроорганизм, его пересаживают в благоприятную для роста среду, где исследуется резистентность (чувствительность) конкретного штамма к активным компонентам антибактериальных препаратов. Чувствительные к антибиотику патогенные клетки не растут в зоне его действия, устойчивые показывают рост колоний.

Распространенным методом проведения антибиотикограммы является метод диффузии смоченных в антибактериальном препарате бумажных полосок в чашке Петри с исследуемой средой. Их выкладывают по поверхности, отступая на два сантиметра от края чашки и от друг друга. После 5-7 часов при комнатной температуре чашу помещают в термостат на срок от 3 до 5 дней. По результатам исследования рост колоний оценивается следующим образом:

• Кольцо вокруг полоски диаметром от 2,5 см говорит о повышенной чувствительности микрофлоры к препарату;
• 2,5-1,5 см – стандартная чувствительность (средняя клиническая эффективность).
• до 1,5 см – слабая реакция, лечение с высокой вероятностью не будет эффективным.
• Отсутствие задержки роста колонии – полная устойчивость к медикаментозному средству.

Известно, что микроорганизмы, невзирая на свой «малый рост», тоже имеют пищевые «пристрастия», температурный оптимум, в общем, среду, которая им идеально подходит, где они чувствуют себя комфортно и хорошо, а поэтому начинают интенсивно размножаться и расти.

Бактериологический посев или, как принято называть короче – бак посев, применяется для получения большого количества микробов одного вида (чистая культура) с целью изучения их физико-химических и биологических свойств, чтобы затем полученные данные использовать для диагностики инфекционных заболеваний.

К сожалению, даже популярные нынче иммуноферментный анализ (ИФА), полимеразная цепная реакция (ПЦР) и другие методы, основным недостатком которых являются ложноположительные или ложноотрицательные результаты, не всегда могут идентифицировать возбудителя. Кроме того, они не способны подобрать антибактериальные препараты направленного действия. Подобную задачу решает бак посев, который часто не спешат назначать, ссылаясь на то, что, например, уреа- микоплазмы медленно культивируется, а стоимость анализа немалая. Однако ведь и здоровье того стоит!

Для питания и дыхания нужны условия

Микробиологи нынче знают, что каждому возбудителю нужна своя «родная» среда с учетом ее рН, окислительно-восстановительных потенциалов, вязкости, влажности и осмотических свойств. Среды могут быть мягкими и твердыми, простыми и сложными, универсальными и не очень, однако во всех случаях они должны обеспечивать питание, дыхание, размножение и рост бактериальной клетки.

пример роста микроорганизмов после бак-посева в питательную среду

Некоторые среды (тиогликолевая, Сабуро) подходят для широкого круга микроорганизмов и называются универсальными. Другие же предназначены только для определенных видов, например, пневмококк и золотистый стафилококк, продуцирующие гемолизины, растут на кровяном агаре, который служит для выделения особо «капризных» и, вместе с тем, опасных штаммов. Таким образом, разновидностей сред множество, где каждая из них выращивает свой круг микроорганизмов.

Цель культивирования микроорганизмов и значимость ее для диагностики

Кроме воды, воздуха, почвы, содержащие в тех или иных концентрациях различные микроорганизмы, в том числе и приносящие болезнь (патогенные), многие отрасли медицинской науки интересуют микробы, живущие на коже и слизистых человеческого организма, которые могут быть представлены:

• Постоянными обитателями, не несущими никакой опасности человеку, то есть, нормальной микрофлорой организма, без которой мы просто жить не можем. Например, исчезновение бактерий, живущих в кишечнике и участвующих в процессе пищеварения, приводит к дисбактериозу, лечить который – дело непростое. Так же происходит и с исчезновением вагинальной микрофлоры. Ее тут же заселяют условно-патогенные микроорганизмы, гарднереллы, например, которые вызывают бактериальный вагиноз (гарднереллез);
• Условно-патогенной флорой, которая приносит вред лишь в больших количествах при определенных условиях (иммунодефицит). Вышеназванная гарднерелла – представитель такого типа микроорганизмов;
• Наличием патогенных микробов, которые в здоровом теле не присутствуют. Они чужды человеческому организму, куда попадают случайно при контакте с другим (больным) человеком и вызывают развитие инфекционного процесса, порой, довольно тяжелого или даже смертельного. Например, встреча с возбудителями сифилиса – еще куда ни шло, на первых порах лечится, а вот (упаси Бог!) выпустит на волю холеру, чуму, черную оспу и др.

К счастью, многие из них побеждены и в настоящее время находятся «за семью печатями» в специальных лабораториях, однако человечество в любой момент должно быть готово к нашествию невидимого врага, способного уничтожить целые народы. Бактериологический посев в подобных случаях играет, пожалуй, главную роль в идентификации микроорганизма, то есть, определении рода, вида, типа и т.д. (токсономическое положение), что очень важно для диагностики инфекционных процессов, в том числе и заболеваний, передающихся половым путем.

Таким образом, методы посева, как и питательные среды, бывают разными, тем не менее, цель у них одна: получить чистую культуру без посторонних примесей в виде микробов других классов, которые обитают повсеместно: в воде, в воздухе, на поверхностях, на человеке и внутри его.

Когда назначается бак посев и как разобраться в ответах?

Название микроорганизма и его количество

Бактериологический анализ пациенты сами себе не назначают, это делает врач, если у него есть подозрения, что проблемы больного, предъявляющего различные жалобы, связаны с проникновением в организм патогенного возбудителя или с усиленным размножением микроорганизмов, постоянно живущих с человеком, но проявляющих патогенные свойства только в определенных условиях. Сдав анализ и через некоторое время получив на руки ответ, человек теряется, а порой и пугается, увидев непонятные слова и обозначения, поэтому, чтобы этого не произошло, хочется дать краткое разъяснение по данному вопросу:

1. Первым пунктом заключения, как правило, стоит название возбудителя на латинском языке, например, Escherichiacoli. Это – кишечная палочка, она является естественным обитателем кишечника и в допустимых количествах никакого вреда не приносит;
2. Следующий пункт – концентрация микроорганизма. Е.coli– обильный рост (1х10^ 6 и более) норма – менее 1x10^ 4 ;
3. Далее – патогенность: флора условно-патогенная.

При исследовании биологического материала на присутствие патогенных микроорганизмов ответ может быть отрицательным или положительным («плохой бак посев»), поскольку организм человека является для них лишь временным пристанищем, а не естественной средой обитания.

Иной раз, в зависимости от того, какой материал подлежит посеву, можно увидеть количество микроорганизмов, выраженное в колониеобразующих единицах на мл (одна живая клетка даст рост целой колонии) – КОЕ/мл. Например, посев мочи для бактериологического исследования при норме дает до 10 3 КОЕ/мл всех выявленных бактериальных клеток, в сомнительных случаях (анализ повторить!) – 10 3 – 10 4 КОЕ/мл, при воспалительном процессе инфекционного происхождения – 10 5 и выше КОЕ/мл. О двух последних вариантах в разговорной речи, порой, выражаются просто: «Плохой бак посев».

Как «найти управу» на патогенный микроорганизм?

Одновременно с посевом материала в таких ситуациях производится посев микрофлоры на чувствительность к антибиотикам, который даст четкий ответ врачу – какие антибактериальные препараты и в каких дозах «испугают» «незваного гостя». Здесь тоже есть своя расшифровка, например:

• Вид микроорганизма, допустим, та же Е.coli в количестве 1х10^ 6 ;
• Название антибиотика с обозначением (S) указывает на чувствительность возбудителя к этому препарату;
• Вид антибиотиков, не действующих на микроорганизм, обозначается символом (R).

Бактериологический анализ представляет особую ценность в определении чувствительности к антибиотикам, поскольку основной проблемой в борьбе с хламидией, микоплазмой, уреаплазмой и др. остается подбор действенного лечения, не приносящего вред организму и не ударяющего по карману пациента.

Таблица: альтернативный пример результатов бак-посева с выявлением эффективных антибиотиков

Правильная подготовка к бактериологическому анализу – залог достоверного результата

Бактериологическому анализу может подвергаться любой биологический материал, взятый у человека (кожа, кровь, сперма, слизистые ротовой полости, дыхательных и мочеполовых путей, желудочно-кишечного тракта, органов зрения, слуха и обоняния и др.). Чаще всего бак посев назначают гинекологи и урологи, поэтому на нем следует несколько остановиться.

Правильная подготовка к бактериологическому посеву будет залогом правильного результата, потому что в противном случае, анализ придется сдавать заново и ждать назначенное время. Как сдать кровь на стерильность из вены – это задача медработников. От больного здесь, как правило, ничего не зависит, он просто предоставляет локтевой сгиб, а медсестра производит забор в стерильную пробирку с соблюдением всех правил асептики и антисептики.

Другое дело – моча или мазок из половых путей. Здесь пациент должен обеспечить первый этап (забор), соблюдая предписанные правила. Следует заметить, что моча женщин и мужчин несколько отличается, хотя в мочевом пузыре у обоих полов она стерильна:

• У женщин при прохождении через мочеиспускательный канал может захватить небольшое количество непатогенных кокков, хотя в целом, часто остается стерильной;
• У мужчин все несколько по-другому. Передняя часть уретры может снабдить проходящую мочу находящимися там:
• дифтероидами;
• стафилококками;
• некоторыми непатогенными грамотрицательными бактериями, что и покажет впоследствии бактериологический анализ.

Однако, если они находятся в допустимой концентрации (до 10 3 КОЕ/мл), то пугаться нечего, это вариант нормы.

Чтобы избежать присутствия других микроорганизмов и максимально обеспечить стерильность взятого материала, перед сдачей анализа производится тщательный туалет половых органов (вход во влагалище у женщин закрывается ватным тампоном – защита от попадания отделяемого половых органов). Для анализа берется средняя порция мочи (начало мочеиспускания в унитаз, приблизительно 10 мл средней порции в стерильную баночку, окончание в унитаз). Пациентам необходимо знать: моча, взятая на посев, должна быть обработана не позднее, чем через два часа при хранении не выше 20°С, поэтому следует рассчитывать время на транспортировку.

Кроме этого материал на бак посев при необходимости берут из уретры и прямой кишки у мужчин, из уретры, прямой кишки, влагалища, шейки матки и цервикального канала – у женщин, но это происходит в медицинском учреждении, куда пациент должен прибыть. Подмывание, спринцевание и использование антисептических средств в таких случаях запрещено.

Другие вопросы, волнующие пациентов

Многие пациенты интересуются, сколько дней делается анализ. Однозначно на этот вопрос ответить нельзя, все зависит от того, какой материал подвергается исследованию и какой возбудитель нужно искать. Иногда ответ готов через 3 дня, иногда через неделю или даже дней 10 – 14, поскольку некоторые образцы требуют пересева на другую среду.

Не обходят стороной люди, направляющиеся на бак посев и вопрос о цене анализа. Примерная стоимость в Москве составляет порядка 800 – 1500 рублей. Разумеется, она может быть выше и зависит от широты спектра бактериологического поиска. Бесплатно анализ, наверное, можно сдать при беременности в женской консультации, или в поликлинике по особым медицинским показаниям.

Для беременных бак посев является обязательным, сдается 2 раза (при постановке на учет и в 36 недель), при этом, мазок берется не только из половых путей, но и со слизистых носа и зева. Объектом поиска в данном случае, кроме урогенитальных инфекций, будет золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus), который в послеродовом периоде может натворить много бед (гнойный мастит и др). Кроме этого, беременным в обязательном порядке делается посев мочи, соскоба влагалищного эпителия и мазки из шейки матки и цервикального канала.

Многие женщины, перед тем как отправиться на процедуру очень боятся таких страшных слов и начинают раздумывать: «А нужно ли это? Может, не пойти». Спешим заверить, что анализы абсолютно безболезненны. Мазок из шейки матки и цервикального канала берется стерильной цитощеткой, не причиняя женщине абсолютно никакой боли, зато впоследствии бак посев из ш/м и ц/к защитит и будущую мать, и плод от возможных осложнений. Объектом поиска при беременности являются возбудители хламидиоза, уреа- и микоплазмы, дрожжеподобный грибок рода Candida (обычно это Candida albicans), трихомонады и другие условно-патогенные и патогенные микроорганизмы.

Видео: ролик-демонстрация по бак-посеву из цервикального канала

Частные случаи, особо интересные сдающим анализы

Попав в половые пути патогенные микроорганизмы, через самое короткое время осваиваются и начинают свою вредную деятельность. Например, всегда патогенные гонококки (Neisseria), являющиеся виновниками довольно неприятной болезни, называемой гонореей и относящейся к ЗППП, чувствуют себя «как дома» буквально на 3 день. Они начинают активно размножаться и смело двигаться по половым путям вверх, захватывая все новые территории. Всем известно, что гонорея нынче неплохо лечится и ее уже почти никто не боится. Но для начала ее нужно найти. Основным методом поиска этой инфекции считается бак посев, культивирование, идентификация с помощью окрашивания по Граму, микроскопия.

Найденные в мазке, взятом «на флору» из половых путей, попарно лежащие «кофейные зерна» (диплококки), не указывают на наличие венерического заболевания. Такая микрофлора влагалища часто появляется в постменопаузе и ни о чем плохом не говорит. Отобранный в нестерильных условиях на предметное стекло и окрашенный метиленовым синим или по Романовскому (цитология) мазок, не может дифференцировать микроорганизм. Он может только предположить и направить пациентку на дополнительное исследование (получение изолированной культуры).

Следует заметить, что, если соскоб со слизистых мочеполовых путей, взятый для посева на уреаплазму, является не таким уж редким явлением, то посева мочи сами врачи часто избегают, поскольку с ней работать сложнее.

Трудности в диагностике создает хламидийная инфекция, приносящая большой вред не только при беременности. Кроме этого, хламидия вызывает множество заболеваний, свойственных не только женщинам, но и мужскому населению тоже, поэтому ее сеют, культивируют, изучают, определяют чувствительность к антибактериальной терапии и, таким образом, борются с ней.

При беременности вообще без бактериологического посева трудно обойтись, поскольку многие микроорганизмы, маскируясь в цитологическом мазке, могут быть пропущены. Между тем, влияние некоторых возбудителей ЗППП на плод бывает губительным. К тому же лечить беременную женщину значительно сложнее, а назначать антибиотики «на глаз» просто недопустимо.

Методы посева

Для выделения чистых культур возбудителей на первом этапе прибегают к их посеву на соответствующие среды, который проводится в специальных (стерильных!) условиях. В основном, перенос материала на среду осуществляется с помощью приспособлений, применяемых еще в 19 века великим Луи Пастером:

• Бактериальной петлей;
• Пастеровской пипеткой;
• Стеклянной палочкой.

Конечно, многие инструменты за 2 столетия претерпели изменения, на смену пришли пластиковые стерильные и одноразовые, однако и старые не остались в прошлом, продолжая и поныне служить микробиологической науке.

Первый этап получения колоний требует соблюдения определенных правил:

1. Посев осуществляется над спиртовкой в боксе, предварительно обработанном дезинфектантами и кварцеванием, или в ламинарном шкафу, обеспечивающем стерильность в рабочей зоне;
2. Одежда медработника, перчатки и среда также должны быть стерильными, поскольку обратное мешает выделению изолированных штаммов;
3. Работать в боксе нужно быстро, но аккуратно, нельзя разговаривать и отвлекаться, при этом – необходимо помнить о личной безопасности, ведь материал может быть заразным.

Выделение штаммов и изучение чистых культур

Выделение штаммов не всегда одинаково, поскольку некоторые биологические среды, находящиеся в человеческом организме требуют индивидуального подхода, например, гемокультуру (кровь) сначала в жидкой среде (соотношение 1 : 10) немного «подращивают», поскольку кровь (неразведенная) может убить микроорганизмы, а затем, через сутки или больше, пересевают на чашки Петри.

Посев мочи, промывных желудочных вод и других жидких материалов тоже имеет свои особенности, где для получения чистой культуры, жидкость сначала следует центрифугировать (условия – асептические!), а уж затем сеять, причем не саму жидкость, а ее осадок.

Культивирование и выращивание колоний осуществляют на чашках Петри или помещают сначала в жидкую среду, разлитую в стерильные флакончики, а затем изолированные колонии еще раз высевают, но уже на скошенный агар и помещают материал на сутки в термостат. Убедившись в чистоте полученной культуры, штаммы переносят на предметное стекло, делают мазок и окрашивают по Граму (чаще всего), Цилю-Нильсену и др. и для дифференцировки изучают морфологию микроба под микроскопом:

• Размер и форму бактериальной клетки;
• Наличие капсул, жгутиков, спор;
• Тинкториальные свойства (отношение микроорганизма к окрашиванию)*.

*Читатель, вероятно, слышал о таком возбудителе, как бледная трепонема? Это – возбудитель сифилиса, а ее название (бледная) поэтому и появилось, что она плохо воспринимает краски и остается слегка розоватой при окрашивании по Романовскому. Микроорганизмы, невоспринимающие анилиновые красители называются грамотрицательными, а воспринимающие – грамположительные. Грамотрицательным бактериям придают розовый или красный цвет при окраске по Граму дополнительные красители (фуксин, сафранин).

Бак посев можно назвать древним анализом, однако его популярность от этого отнюдь не падает, хотя современная бактериология имеет возможности выделения не только штаммов, но и отдельной клетки из него, которая называется клоном. Однако для получения клона необходим специальный прибор – микроманипулятор, который в обычных лабораториях отсутствует, поскольку применяется, в основном, в научно-исследовательских целях (генетические исследования).

Антибиотики давно стали обязательным составляющим элементом любой антибактериальной терапии.

К сожалению, ритм жизни у многих людей таков, что они не могут позволить себе длительное отсутствие на рабочем месте.

По этой причине они самостоятельно назначают себе подобные препараты при малейших признаках простуды.

Однако делать этого категорически нельзя, ведь бактерии способны активировать особый механизм защиты от тех или иных лекарственных средств.

Анализ на чувствительность к антибиотикам выполняют с помощью лабораторных методов для выявления возбудителя того или иного заболевания и его количество в организме. Данное исследование позволяет подобрать оптимальную схему приема препарата.

Специалисты используют для этого 2 основных способа:

1. эмпирический — информацию получают на основании результатов наблюдений или опытов;
2. этиотропный — в этом случае вначале выявляют возбудителя инфекции, а затем определяют степень его чувствительности к тем или иным средствам.

В зависимости от восприимчивости к антибиотикам специалисты разделяют все микроорганизмы на 3 группы:

• чувствительные (S) — для их устранения достаточно стандартной дозы препарата;
• умеренно-устойчивые (I) — им требуется максимальное количество антибиотика;
• устойчивые ® — их невозможно ликвидировать даже повышенной нормой.

При этом у разных людей реакция тех или иных категорий бактерий на антибиотики может отличаться. Поэтому рекомендация о приеме препаратов лишь на основании усредненных статистических данных иногда не приносит желаемых результатов. К тому же необходимо учитывать, что прием данной группы медикаментов уничтожает не только болезнетворные бактерии, но и полезную микрофлору.

Нередки ситуации, когда неверно назначенный препарат ликвидировал нужные бактерии, а вредные микробы оставались невредимы. Для достижения наибольшей эффективности при лечении анализ на чувствительность к антибиотикам необходимо проводить каждый раз при наличии подозрений на бактериальную природу заболеваний.

Врач может назначить проведение подобного исследования по следующим причинам:

• при возникновении необходимости в замене препарата из-за развившихся аллергических реакций;
• для выявления наиболее эффективного медикамента в данном конкретном случае;
• при наступлении фазы привыкания к лекарству;
• из-за малой эффективности выбранного средства.

В настоящее время существует 3 основных способа определения чувствительности бактерий к антибиотику: диско-диффузный, Е-тест и метод серийного разведения. Все они представляют собой микробиологические исследования, поэтому чаще их называют бактериологическим посевом. Простейшим и распространенным является диско-диффузный.

В специальной лабораторной посуде создается благоприятная среда для бактерий, куда их впоследствии и засевают. После этого в чашке Петри размещают пропитанные антибиотиком картонные диски, и бакпосев размещается в термостате на По истечении указанного времени специалист оценивает эффективность каждого вида антибиотика по зоне подавления роста патогенных микроорганизмов. Е-тест проводится таким же способом, как и предыдущее исследование. Только в этом случае вместо дисков используют полоску, на которую нанесен антибиотик в определенной градации — его концентрация увеличивается от минимальных до максимальных показателей.

Через 12 часов будет ярко выражена зона подавления роста бактерий. Место соприкосновения этого участка и полоски определяют как минимальную подавляющую концентрацию (МПК) — в расшифровке этот показатель означает наименьшее количество препарата, необходимого для уничтожения определенного вида бактерий.

Данный вид анализа на чувствительность к антибиотикам стоит недешево, поэтому используется нечасто. При использовании метода серийного разведения концентрация антибиотика уменьшается. Составы из пробирок вносятся в питательную среду (агар или бульон) и засеваются микроорганизмами. После посуду помещают в термостат на несколько часов, а затем анализируют полученные результаты. Замутненное содержимое пробирки говорит о наличии патогенной флоры, концентрация антибиотика в ней мала. Количество препарата в первой емкости без помутнения будет считаться достаточным для лечения.

Мазок на чувствительность к антибиотикам: подготовка к анализу и его проведение

В качестве биоматериала для мазка на чувствительность к антибиотикам используют различные образцы ткани или производные функционирования организма человека. Образец наносится на лабораторное стекло, а затем изучается под микроскопом.

При подозрении на те или иные болезни берется различный материал. Больного с возможной ангиной врач-отоларинголог (ЛОР) направит на сдачу мазка из зева и носа, а гинеколог при постановке на учет по беременности и родам обязательно возьмет слизь из цервикального канала пациентки. Для получения достоверного результата необходимо правильно подготовиться к анализу. Когда мазок на чувствительность к антибиотикам планируется брать из мочеполовых органов (уретры или микрофлоры влагалища) следует отказаться от интимных контактов за Непосредственно перед анализом не следует мочиться часов мужчинам и не менее 2 часов — дамам. Если проводился курс лечения антибиотиками, то после его окончания должно пройти минимум 2 недели.

При наличии воспаления уровень лейкоцитов будет повышенным. В этом случае врач предложит либо стандартную схему лечения антибиотиками, либо проведение дополнительных исследований. Мокроту на анализ сдают с утра натощак. Перед забором чистят зубы и полощут рот. Для исследования биоматериал доставляют в течение 1 часа. Собранные пробы засевают в специальную среду.

Затем пробирки с анализами устанавливают в термостат, где созданы идеальные условия для жизнедеятельности бактерий. Прибору задают определенные параметры: температуру, влажность и период времени. По истечении указанного срока образцы извлекают из термостата и приступают к контрольному осмотру выросших колоний. На основании полученных данных составляют антибиотикограмму, определяющую чувствительность выявленных микроорганизмов к антибактериальным средствам и бактериофагам.

В зависимости от метода исследования врач может получить данные анализов через дня после сдачи пациентом биоматериала в лабораторию. Результаты мазка на чувствительность к антибиотикам считаются действительными только во время течения того заболевания, по поводу которого его назначали. Причем этот срок не включает время приема антибиотиков — прием лекарственных средств может повлиять на результат исследования.

Анализ крови и мочи на чувствительность к антибиотикам

Нередко для изучения используют и другой биологический материал. В поликлиниках широко распространен анализ крови на чувствительность к антибиотикам. Особая подготовка к нему не требуется, единственное условие — исследование проводится до начала антибиотикотерапии.

У взрослых пациентов берут минимум 15 мл крови, у детей — не менее 5 мл. Алгоритм забора биоматериала прост — взятую при помощи одноразового катетера кровь помещают в стерильную пробирку с резиновой пробкой, в которой создана питательная для возбудителей болезни среда. Как правило, через часов результат анализа крови на чувствительность к антибиотикам уже известен, однако, если микроорганизмы относятся к классу медленнорастущих, то потребуется несколько дней наблюдений. Не менее часто используется анализ мочи на чувствительность к антибиотикам.

Показаниями для него может стать цистит, уретрит, воспаление почек — пиелонефрит. В этом случае понадобится подготовка. Для анализа берется средняя порция утренней мочи, при этом несколько первых и последних капель не должны попадать в стерильную емкость. Сбор биоматериала для анализа мочи на чувствительность к антибиотикам проводится после утренних гигиенических процедур без применения антисептических средств.

Хотя в мочевом пузыре моча стерильна, после прохождения через женские половые органы она может получить непатогенных кокков в малой концентрации, но в большинстве случаев остается чистой.

У мужчин в этом отношении все иначе: из передней части уретры в мочу попадает целый спектр микроорганизмов — стафилококки, дифтероиды и некоторые непатогенные бактерии. Небольшие отклонения в расшифровке анализа мочи на чувствительность к антибиотикам входят в категорию нормы. В некоторых случаях (например, при лактационном мастите) на анализ берут грудное молоко.

Проба берется перед кормлением ребенка следующим образом:

• обрабатывают спиртом кожу вокруг соска;
• сцеживается небольшое количество молока — около 15 мл, следующие жидкости из каждой груди собирается в отдельный контейнер. Биоматериал должен быть доставлен в лабораторию не позднее, чем через 2 часа.

Исследование спермы проводится при подозрении на воспалительный процесс или инфекционное заболевание. Эякулят получают при мастурбации или с помощью вибромассажа полового органа. Кроме этого, возможна стимуляция эякуляторного центра электродами, вводимыми в прямую кишку.

Сперму собирают в предварительно прогретую до температуры тела, чистую и сухую емкость. Перед сбором биоматериала необходимо тщательно вымыть руки и половой орган. От интимных отношений лучше воздержаться за дней до взятия проб. В этот же период не следует употреблять алкоголь и посещать баню. При проведении анализа крови на чувствительность к антибиотикам, а также мочи, кала, грудного молока и спермы, пробу располагают в специальной среде, благоприятной для жизнедеятельности болезнетворных бактерий.

В процессе размножения они создают колонии — их затем и оценивает специалист. На основании полученных данных составляют антибиотикограмму — перечень антибактериальных препаратов, к которым чувствительны обнаруженные в организме бактерии. Нельзя однозначно ответить на вопрос о сроках готовности анализа. Она напрямую зависит от биоматериала. Обычно для проведения исследования достаточно но в некоторых случаях может потребоваться неделя и даже две.

Результаты анализа на чувствительность к антибиотикам действительны лишь на период заболевания, при котором он был рекомендован. После проведения антибактериального лечения картина может разительно поменяться. При возникновении подозрений на инфекционное заболевание ни в коем случае не стоит заниматься самолечением и принимать антибиотики. Это чревато серьезными последствиями. Принимать подобные решения должен исключительно высококвалифицированный специалист.